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Analisi cromosomica su villi Analisi cromosomica su villi coriali: diecimila casi. Affidabilità coriali: diecimila casi. Affidabilità
e problematiche della diagnosi e problematiche della diagnosi cromosomica prenatale nel primo cromosomica prenatale nel primo
trimestre di gravidanzatrimestre di gravidanza
Tesi di Specializzazione di:
D.ssa Monia Rinaldini
UNIVERSITÀ DEGLI STUDI “G. D’ANNUNZIO”. CHIETIFacoltà di Medicina e Chirurgia
Scuola di Specializzazione in Genetica MedicaDirettore Prof G. Palka
Relatore:
Chiar.mo Prof. G. Palka
ANNO ACCADEMICO 2002 - 2003
Villi coriali (CVS)Villi coriali (CVS)
CVS
citotrofoblasto mesoderma
metodo semidiretto
metodo a coltura
tessuti placentari
I tessuti placentari possono mostrare aberrazioni cromosomiche non
specificatamente fetali, ma confinate alla placenta
Le linee guida protocollari della Società di Geneticaconsigliano l’utilizzo sia
della metodica semidiretta che colturale nella attività
diagnostica
ScopoScopo
Presentare una casistica di 10.000 analisi cromosomiche consecutive su campioni di villi coriali (CVS) eseguite con entrambi i metodi.
Evidenziare affidabilità e problematiche della diagnosi cromosomica prenatale mediante prelievo di villi coriali nel primo trimestre di gravidanza.
Materiali e metodi (1)Materiali e metodi (1)
Indicazioni per l’indagine
citogeneticaEtà materna
Marcatori sierici ad
aumentato rischio
Familiarità per anomalie
cromosomiche
Segni ecografici alterati
Genitori portatori di anomalie
cromosomiche
Materiali e metodi (2)Materiali e metodi (2)
Analisi cromosomica su
villi coriali
Metodo semidiretto Metodo a coltura
Bandeggi:•QFQ di routine•GTG occasionale•DA-DAPI occasionale
Metafasi analizzate in totale su entrambi i preparati:•20 per cariotipo omogeneo•Numero più esteso nei casi di mosaicismo
Materiali e metodi (3)Materiali e metodi (3)Analisi di verifica e
controllo di aberrazioni
cromosomiche di dubbia interpretazioneAnalisi
cromosomiche su colture di
liquido amniotico
Analisi cromosomiche su colture di sangue
periferico postnatale
Esclusione di Disomia
Uniparentale (UPD)
Identificazione di piccoli marcatori
cromosomici (FISH)
Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Aberrazioni numeriche autosomiche. (1)Aberrazioni numeriche autosomiche. (1)
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
47 +18 16 confermato coltura TAB
46 XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
47 +13 2 conferm coltura mos conferm LA mos post TAB
47 +13 5 confermato coltura TAB
47 +13 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB
47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Aberrazioni numeriche autosomiche. (2)Aberrazioni numeriche autosomiche. (2)
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB
1 confermato coltura (47, +21) perso al follow up
1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segni clinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
46/47 +13 7 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +3 2 non conferm coltura FU fenotipo normale
46/47 +8 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
46/47 +22 2 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +7 1 confermato coltura non confermato LA no UPD; FU normale
46/47 +9 1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +12 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +ESAC 1 confermato coltura materno
1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 ish18- 1 non conferm coltura 46/47,+18 perso al follow up
46/47 +invdup15 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 confermato coltura confermato LA perso al follow up
Risultati. Tab 2. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Risultati. Tab 2. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Aberrazioni gonosomiche.Aberrazioni gonosomiche.
citotrofoblasto casicoltura
mesoderma follow up
45,X /46,XY 5 46,XY maschio normale
45,X /46,XX 2 46,XX LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21 1 (2/27/1) LA 46,XX
45,X 1 45,X / 46,XX perso al follow up
45,X 6 45,X 3/6 NT > 4 - TAB
45,X 1 46,X,dic(Y)(q11.2)LA 45,X / 46,X,dic(Y)
(q11.2)
45,X 1 46,XYtrofoblastoFISH 14/300-
Y+;TAB
47,XXY 2 confermato
47,XYY 3 confermato
47, XXX 1 confermato
Risultati. Tab 3. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Risultati. Tab 3. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma. Riarrangiamenti strutturali.Riarrangiamenti strutturali.
formula cromosomica (trofoblasto e coltura)familiarit
à
controllo citogenetica
su LA o tessuto follow up
46,XX t (13;19) (p11;p11) dn confermato fenotipo normale
46,XX t (1;18) (p32;q11.2) dn confermato fenotipo normale
46,XX t (4;10) (q33;q22) dn confermato fenotipo normale
46,XX/46,XX -11 + der (11) t (11p;?) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XY - 18 + der (18) t (3;18) (p21.3;p11.3) pat confermato malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY - 15 + der (15) t (15p;?) dn 46, XY fenotipo normale
46,XY - 14 + der (18) t (14;18) (q21;q12) pat confermato malformazioni TAB 20w
46,XY- 20 + der (20)
dup 20 (p11.1p11.2) dn confermato no malformaz TAB 11w
46,XY ring (15q) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XX del 5 (p13) dn 46, XX fenotipo normale
46,XX dn46, XX, del (5)
(p12) SP cri du chat/morte perinatale
45,XX o XY der (13;14) (q10;q10) mat 6 casi4/UPD negativa/ fenotipo
normale
45,XX o XY der (13;14) (q10;q10) pat 3 casi1/UPD negativa/fenotipo
normale
45, XY ish der (15;21) (q10;q10) dnishder (15;22)
(q10;q10)ishder (15;22)(q10;q10)UPDneg
fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 21risomia 21
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +21 70 confermato coltura TAB
46/47 +21 6 non conferm coltura non confermato LA FUfenotipo normale
3 conferm coltura mos conferm LA mos TAB1 confermato coltura perso al
(47,+21) follow up1 non conferm coltura confermato LA TAB
46 XX 1 46/47,+21 coltura 46/47,+21 LA TAB/segniclinici
46 XY 1 46/47,+21 coltura 46,XY LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 18risomia 18
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +18 16 confermato coltura TAB
46XX 2 47,XX,+18 47,XX,+18 LA markersUS
46/47 +18 6 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +18 1 conferm coltura confermato LA igroma cistico
Tutti i casi di trisomia 18 a mosaico dimostratisi veri nel feto erano accompagnati da anomalie ecografiche rilevanti, onfalocele e igroma cistico
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 13risomia 13
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +13 2 conferm coltura mos conferm LA mos post TAB
47 +13 5 confermato coltura TAB47 +13 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo
normale
46/47 +13 7 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 13risomia 13
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +13 2 conferm coltura mos conferm LA mos post TAB
47 +13 5 confermato coltura TAB47 +13 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo
normale
46/47 +13 7 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 13risomia 13
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +13 2 conferm coltura mos conferm LA mos post TAB
47 +13 5 confermato coltura TAB47 +13 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo
normale
46/47 +13 7 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)TTrisomia 13risomia 13
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +13 2 conferm coltura mos conferm LA mos post TAB
47 +13 5 confermato coltura TAB47 +13 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo
normale
46/47 +13 7 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie omogeneeAltre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
47 +10 1 confermato coltura confermato cute post TAB47 +10 1 confermato coltura non confermato LA ongoing
47 +15 2 non conferm coltura non confermato LA 1/UPD-/fenotipo normale
47 +15 1 confermato LA post SAB
47 +16 1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale47 +16 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
47 +20 2 conferm coltura mos non confermato LA FU fenotipo normale47 +20 1 non conferm coltura FU fenotipo normale
47 +ESAC 1 failed coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale47 +ESAC 2 confermato coltura confermato LA (DN) FU fenotipo normale
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie a mosaicoAltre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
46/47 +3 2 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +8 1 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +22 2 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +7 1 confermato coltura non confermato LA no UPD; FU normale46/47 +9 1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +12 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +ESAC 1 confermato coltura materno1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 ish18- 1 non conferm coltura 46/47,+18 perso al follow up46/47 +invdup15 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 confermato coltura confermato LA perso al follow up
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie a mosaicoAltre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
46/47 +3 2 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +8 1 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +22 2 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +7 1 confermato coltura non confermato LA no UPD; FU normale46/47 +9 1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +12 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +ESAC 1 confermato coltura materno1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 ish18- 1 non conferm coltura 46/47,+18 perso al follow up46/47 +invdup15 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 confermato coltura confermato LA perso al follow up
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie a mosaicoAltre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
46/47 +3 2 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +8 1 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +22 2 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +7 1 confermato coltura non confermato LA no UPD; FU normale46/47 +9 1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +12 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +ESAC 1 confermato coltura materno1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 ish18- 1 non conferm coltura 46/47,+18 perso al follow up46/47 +invdup15 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 confermato coltura confermato LA perso al follow up
Risultati (Tab.1)Risultati (Tab.1)Altre trisomie a mosaicoAltre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi mesoderma liquido amniotico (LA) follow up
46/47 +3 2 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +8 1 non conferm coltura FU fenotipo normale46/47 +22 2 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +7 1 confermato coltura non confermato LA no UPD; FU normale46/47 +9 1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale46/47 +12 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 +ESAC 1 confermato coltura materno1 confermato coltura non confermato LA FU fenotipo normale1 failed coltura non confermato LA FU fenotipo normale
46/47 ish18- 1 non conferm coltura 46/47,+18 perso al follow up46/47 +invdup15 1 non conferm coltura non confermato LA FU fenotipo normale
1 confermato coltura confermato LA perso al follow up
Risultati (Tab.2)Risultati (Tab.2)AAberrazioni gonosomicheberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto casicoltura
mesoderma follow up
45,X /46,XY 5 46,XY maschio normale
45,X /46,XX 2 46,XX LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21 1 (2/27/1) LA 46,XX
45,X 1 45,X / 46,XX perso al follow up
45,X 6 45,X 3/6 NT > 4 - TAB
45,X 1 46,X,dic(Y)(q11.2)LA 45,X / 46,X,dic(Y)
(q11.2)
45,X 1 46,XYtrofoblastoFISH 14/300-
Y+;TAB
47,XXY 2 confermato
47,XYY 3 confermato
47, XXX 1 confermato
Risultati (Tab.2)Risultati (Tab.2)AAberrazioni gonosomicheberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto casicoltura
mesoderma follow up
45,X /46,XY 5 46,XY maschio normale
45,X /46,XX 2 46,XX LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21 1 (2/27/1) LA 46,XX
45,X 1 45,X / 46,XX perso al follow up
45,X 6 45,X 3/6 NT > 4 - TAB
45,X 1 46,X,dic(Y)(q11.2)LA 45,X / 46,X,dic(Y)
(q11.2)
45,X 1 46,XYtrofoblastoFISH 14/300-
Y+;TAB
47,XXY 2 confermato
47,XYY 3 confermato
47, XXX 1 confermato
Risultati (Tab.2)Risultati (Tab.2)AAberrazioni gonosomicheberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto casicoltura
mesoderma follow up
45,X /46,XY 5 46,XY maschio normale
45,X /46,XX 2 46,XX LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21 1 (2/27/1) LA 46,XX
45,X 1 45,X / 46,XX perso al follow up
45,X 6 45,X 3/6 NT > 4 - TAB
45,X 1 46,X,dic(Y)(q11.2)LA 45,X / 46,X,dic(Y)
(q11.2)
45,X 1 46,XYtrofoblastoFISH 14/300-
Y+;TAB
47,XXY 2 confermato
47,XYY 3 confermato
47, XXX 1 confermato
Risultati (Tab.2)Risultati (Tab.2)AAberrazioni gonosomicheberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto casicoltura
mesoderma follow up
45,X /46,XY 5 46,XY maschio normale
45,X /46,XX 2 46,XX LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21 1 (2/27/1) LA 46,XX
45,X 1 45,X / 46,XX perso al follow up
45,X 6 45,X 3/6 NT > 4 - TAB
45,X 1 46,X,dic(Y)(q11.2)LA 45,X / 46,X,dic(Y)
(q11.2)
45,X 1 46,XYtrofoblastoFISH 14/300-
Y+;TAB
47,XXY 2 confermato
47,XYY 3 confermato
47, XXX 1 confermato
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)TTraslocazioni reciproche apparentemente bilanciateraslocazioni reciproche apparentemente bilanciate
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
46,XX t (13;19) (p11;p11) dn confermato fenotipo normale 46,XX t (1;18) (p32;q11.2) dn confermato fenotipo normale 46,XX t (4;10) (q33;q22) dn confermato fenotipo normale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciateAberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat confermato malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?) dn 46, XY fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12) pat confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn confermato no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13) dn 46,XX fenotipo normale
46,XX dn 46, XX, del (5)(p12) SP cri du chat/morte perinatale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciateAberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat confermato malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?) dn 46, XY fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12) pat confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn confermato no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13) dn 46,XX fenotipo normale
46,XX dn 46, XX, del (5)(p12) SP cri du chat/morte perinatale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciateAberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat confermato malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?) dn 46, XY fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12) pat confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn confermato no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13) dn 46,XX fenotipo normale
46,XX dn 46, XX, del (5)(p12) SP cri du chat/morte perinatale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciateAberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat confermato malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?) dn 46, XY fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12) pat confermato malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn confermato no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q) dn confermato malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13) dn 46,XX fenotipo normale
46,XX dn 46, XX, del (5)(p12) SP cri du chat/morte perinatale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)TTraslocazioni robertsonianeraslocazioni robertsoniane
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) mat 6/confermato 4/UPDnegativa/fenotipo normale
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) pat 3/confermato 1/UPDnegativa/fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10) dn ishder(15;22)(q10;q10) ishder (15;22)(q10;q10)UPDnegfenotipo normale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)TTraslocazioni robertsonianeraslocazioni robertsoniane
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) mat 6/confermato 4/UPDnegativa/ fenotipo normale
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) pat 3/confermato 1/UPDnegativa/fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10) dn ishder(15;22)(q10;q10) ishder (15;22)
(q10;q10)UPDnegfenotipo normale
Risultati (Tab.3)Risultati (Tab.3)TTraslocazioni robertsonianeraslocazioni robertsoniane
formula cromosomica familiarità controllo citogenetica follow up(trofoblasto e coltura) su LA o tessuto
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) mat 6/confermato 4/UPDnegativa/ fenotipo normale
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10) pat 3/confermato 1/UPDnegativa/fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10) dn ishder(15;22)(q10;q10) ishder (15;22) (q10;q10)UPDnegfenotipo normale
DiscussioneDiscussione
Le trisomie 21 e 18 omogenee senza discrepanze tra trofoblasto e mesoderma, confrontate con trials internazionali, consentono di non dubitare dell’affidabilità nell’identificazione di queste due comuni trisomie.
In due casi di trisomia 18 il trofoblasto mostrava cariotipo normale, mentre gli altri tessuti (mesoderma e liquido amniotico) mostravano trisomia 18 omogenea. Tali casi presentavano segni ecografici importanti: igroma ed onfalocele.
La trisomia 13 ha mostrato un caso, sugli 8 totali, ove il trofoblasto positivo non ha trovato riscontro sugli altri tessuti.
Trisomie autosomiche omogeneeTrisomie autosomiche omogenee
DiscussioneDiscussioneTrisomie autosomiche omogeneeTrisomie autosomiche omogenee
Le trisomie 10 e 15 in un caso su due si sono dimostrate rappresentative della condizione fetale sia che fossero viste solo nel trofoblasto o nel trofoblasto e mesoderma.
Le trisomie 16 e 20 non sono mai state confermate nel feto.
Nel campo delle trisomie autosomiche omogenee: 8 casi sono falsi positivi nel trofoblasto (talvolta anche nel
mesoderma), con la esclusione solo delle trisomie 21 e 18; 2 casi falsi negativi in cui il trofoblasto manca di identificare
la trisomia 18 omogenea.
DiscussioneDiscussioneTrisomie autosomiche a mosaicoTrisomie autosomiche a mosaico
Trisomia 21 a mosaico: 4 casi risultano veri mosaicismi; 7 casi risultano falsi positivi, di cui 6 hanno la trisomia confinata al
trofoblasto, uno confinata al mesoderma; Un caso falso negativo con trofoblasto a cariotipo normale, mesoderma
e liquido amniotico a mosaico.
Trisomia 18 a mosaico: Un caso risulta vero mosaicismo (igroma cistico); 6 casi risultano falsi positivi con trisomia confinata al trofoblasto.
Tutti gli altri casi di mosaicismo per aberrazioni numeriche autosomiche trovate nel trofoblasto in varia misura confermate o meno nella coltura di mesoderma, non vennero confermate sul liquido amniotico ed ebbero follow up normale.
DiscussioneDiscussioneCromosomi marcatori (ESAC)Cromosomi marcatori (ESAC)
Marcatori sovranumerari omogenei: 3 casi de novo confermati su liquido amniotico ebbero
fenotipo normale alla nascita, ma non furono disponibili per ulteriori studi;
Marcatori sovranumerari a mosaico: un caso di origine materna; 3 casi non confermati; un caso +invdup(15) confermato; un caso complesso dove un marcatore non derivativo 18 confinato al
trofoblasto del villo si associò ad un mosaicismo per trisomia 18 nel liquido amniotico: il caso fu perso al follow up.
DiscussioneDiscussioneAnomalie gonosomiche dei cromosomiAnomalie gonosomiche dei cromosomi
Corredi a 47 cromosomi: trisomia X, maschio a disomia X o Y, hanno trovato sempre conferma
fetale;
Monosomia X: 6 casi hanno trovato conferma nel mesoderma; 2 casi hanno mostrato mosaicismo con una linea maschile (cromosoma
Y normale o derivativo); un caso ha mostrato mosaicismo con una linea 46,XX.
Anomalie gonosomiche a mosaico: 8 casi di mosaicismo nel trofoblasto non hanno trovato conferma nella
coltura di mesoderma;
DiscussioneDiscussioneRiarrangiamenti strutturaliRiarrangiamenti strutturali
Traslocazione reciproca bilanciata: 3 casi de novo hanno trovato conferma sui tessuti fetali.
Riarrangiamenti sbilanciati: 5 casi hanno trovato conferma sui tessuti fetali; un caso di derivativo 15 a mosaico e un caso con delezione parziale del
5p non sono stati confermati su liquido amniotico con fenotipo normale (falsi positivi);
Un caso con cariotipo femminile normale identificato in trofoblasto e coltura ha rivelato alla nascita delezione 5p12 su sangueperiferico e sindrome Cri du Chat con morte perinatale (falso negativo). Fig. 1-2
Fig.1. Metafase 46,XX (QFQ)da preparato semidiretto ditrofoblasto. I cromosomi 5 a confronto con del(5)(p12) del cariotipo postnatale (GTG)
Fig.2. Metafase 46,XX (QFQ)da preparato colture di mesoderma. I cromosomi 5 a confronto con del(5)(p12) del cariotipo postnatale (GTG)
DiscussioneDiscussioneRiarrangiamenti strutturaliRiarrangiamenti strutturali
Traslocazioni robertsoniane: 9 casi familiari con t(13;14), negativi alla UPD 14 in 5 casi esaminati,
hanno mostrato sempre follow up normale; un caso discordante fra villo coriale, liquido amniotico e sangue
neonatale per una traslocazione tra un cromosoma 15 e 21 nel villo, che era 15 e 22 negli altri tessuti ha mostrato fenotipo normale.
ConclusioniConclusioni Questa casistica decennale di 10000 casi mette in luce
il principale problema biologico per l’affidabilità diagnostica dei villi coriali: il possibile confinamento placentare del cariotipo individuato con l’analisi dei tessuti del trofoblasto e a volte anche del mesoderma.
4 casi sui 10000 sono risultati normali nel trofoblasto ed un caso anche su coltura, si trattava di: due trisomie 18; un mosaicismo per trisomia 21; una delezione 5p – Cri du Chat;
ConclusioniConclusioni Le aberrazioni numeriche autosomiche trovate sui villi
coriali di questa serie mostrano immediata significatività solo per le trisomie comuni 18 e 21, mentre gli altri casi di trisomie omogenee necessitano di ulteriori controlli a prescindere dal dato del mesoderma.
La presenza di 2 falsi negativi di trisomia 18 limita l’utilizzo del villo coriale come strumento rapido di verifica di dati ultrasonografici allarmanti
ConclusioniConclusioni Fra le aberrazioni numeriche a mosaico sul trofoblasto solo
la trisomia 21 sembra meritare attenzione circa la conferma su tessuti diversi e/o fetali, infatti il cariotipo normale su coltura non esclude la presenza di tale aberrazione nel feto.
Un caso di falso negativo per la trisomia 21 a mosaico vera, esalta la necessità del cariotipo sul mesoderma come dato integrato alla diagnosi cromosomica sui villi coriali
ConclusioniConclusioni
Gran parte delle trisomie autosomiche meno frequenti e gran parte dei mosaicismi si sono dimostrate confinate alla placenta, così come i mosaicismi per le anomalie numeriche dei gonosomi.
Anche gli riarrangiamenti strutturali non sfuggono al rischio del confinamento placentare essendosi dimostrati in 2 casi su 10 della nostra serie.
ConclusioniConclusioni Nella coscienza delle problematiche biologiche insite nell’uso
diagnostico di un tessuto annesso al feto, ma con una storia embrionale indipendente, l’analisi cromosomica sui villi coriali si dimostra strumento efficace e rapido adatto nelle gravidanze a rischio dove la tempestività della conoscenza del cariotipo supporta il managemant della gravidanza stessa.
La attenta e completa applicazione dei protocolli diagnostici deve essere confortata da una completa informazione dei pazienti e dei loro consulenti sulle problematiche ed i limiti insiti nell’uso del tessuto dei villi coriali nella diagnosi cromosomica fetale allo scopo di evitare incaute e totalizzanti aspettative.
Un grazie particolare al Dr. Lamberto Camurri ed ai colleghi del laboratorio HI-TECH di Parma, ai genetisti ed ai tecnici dei laboratori ARCELLA e BIOLAB di Padova e a tutti i colleghi Ostetrici che con il loro insostituibile lavoro hanno reso possibile questo studio.