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30/05/2016
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Diagnosi Genetica Preimpianto
delle Patologie Mitocondriali
D. Zuccarello
Daniela.zuccarello@unipd.it
Roma, 28 maggio 2016
Università degli Studi - Azienda Ospedaliera Padova
UOC di GENETICA CLINICA ED EPIDEMIOLOGICA
La diagnosi genetica pre-impianto (PGD) è la forma
più precoce di diagnosi pre-natale
Consente di conoscere la costituzione genetica Consente di conoscere la costituzione genetica
degli embrioni PRIMA del loro trasferimento in degli embrioni PRIMA del loro trasferimento in
uteroutero
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Opzioni riproduttive per coppie a rischio genetico
- Roulette riproduttiva
- Diagnosi prenatale
e aborto terapeutico
- Eterologa
- Adozione
- No figli
- SOLUZIONE: PGD
Diagnosi Genetica Pre-impianto:
APPLICABILITA’APPLICABILITA’
La diagnosi pre-impianto puo’ essere applicata a coppie infertili portatrici di :
� Malattie monogeniche a trasmissione:
� autosomica recessiva (Fibrosi Cistica, Beta Talassemia, SMA, etc.)
� legata al cromosoma X (Sindrome X-Fragile, Distrofia Muscolare, etc..)
� autosomica dominante (CMT, Distrofia Miotonica, etc..)
� Traslocazioni cromosomiche bilanciate:
� Reciproche
� Robertsoniane
� Altre indicazioni:
� Età materna superiore a 38 anni
� Ripetuti falliti impianti / poliabortività
� Fattore maschile grave
PGS
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Diagnosi Genetica Pre-impianto:
APPLICABILITA’APPLICABILITA’
Indicazioni possibili ma controverse :
� Malattie mitocondriali (mtDNA)
� HLA matching
� Patologie a insorgenza tardiva
� Suscettibilità oncologica
MALATTIE MITOCONDRIALI MALATTIE MITOCONDRIALI
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COPPIA INFERTILE CON MALATTIA GENETICA
CICLO DI PMA CON FECONDAZIONE E SVILUPPO IN VITRO FINO AL 5° GIORNO
PRELIEVO CELLULE TROFOBLASTO e CONGELAMENTO EMBRIONI
ANALISI GENETICA
COMUNICAZIONE DEI RISULTATI E TRASFERT DEGLI EMBRIONI
CONSULENZA GENETICA, GINECOLOGICA E ANDROLOGICAP
GD
Ginecologia Embriologia
Genetica
Multidisciplinareità della PGD
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Tecniche di PGDTecniche di PGD
•• 1^ Polar Body1^ Polar Body
•• Cleavage Stage Embryos (day 3)Cleavage Stage Embryos (day 3)
•• Blastocyst (day 5)Blastocyst (day 5)
PCGDPCGD
PGDPGD
PGDPGD GOLD STANDARD
Day3Day5
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The mutation load determined in blastomeres accurately reflects the mutation load in the embryo
and the mutation levels in a blastomere reliably predict the mutant load of the future child
9 pz at day-3
- Malattie a insorgenza tardiva: bambino “sano” alla nascita
- Biopsia a day-3: diminuzione potenziale impianto
- Livello “safe” di eteroplasia: 5% ?
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Nuclear genome transfer
To avoid any possible confusion with the process of cloning, it is important to stress
that all products of meiosis (pronuclei and polar bodies) are genetically unique.
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28 Centri Italiani PGD
NomeCentro Città Regione Tipo di centro
HERA - U.M.R. CT Sicilia Convenzionato
Futura Diagnostica Medica FI Toscana Convenzionato
CENTRO DEMETRA FI Toscana Convenzionato
Centro Florence FI Toscana Convenzionato
HUMANITAS MI Lombardia Convenzionato
Ospedale San Raffaele MI Lombardia Convenzionato
Casa di Cura Città di Udine UD Friuli VG Convenzionato
Centro Andros PA Sicilia Privato
9.baby FAMILY AND FERTILITY CENTER BO Emilia Romagna Privato
Alma Res RM Lazio Privato
ALTAMEDICA (ex artemisia) RM Lazio Privato
ARC STER di mestre VE Veneto Privato
C. M. R. TO Piemonte Privato
Centro di Biologia della Riproduzione PA Sicilia Privato
Centro HERA NA Campania Privato
EUBIOS BZ Trentino Privato
European Hospital RM Lazio Privato
GATJC FERTILITY CENTER - Gioia Tauro RC Calabria Privato
GENERA Marostica VI Veneto Privato
GENERA Napoli NA Campania Privato
GENERA Roma RM Lazio Privato
GENERA Umbertide PG Umbria Privato
LIVET TO Piemonte Privato
MOMO' fertiLIFE BT Puglia Privato
Poliambulatorio Privato GYNEPRO BO Emilia Romagna Privato
SISMER BO Emilia Romagna Privato
Fondazione Ca' Granda Ospedale Maggiore Policlinico MI Lombardia Pubblico
Microcitemico di Cagliari CA Sardegna Pubblico
Centro Pubblico (2)
Centro Privato (19)
Centro Convenzionato (7)
28 Centri Italiani PGD
Status Centri
Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"
Fonte: anno 2015
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PGD-A >150 cicli/Y (3)
PGD-A <150 cicli/Y (15)
PGD >30 cicli/Y (6)
PGD <30 cicli/Y (13)
Centro in attivazione (4)
Dati non forniti (4)
Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015
28 Centri Italiani PGD
Numero cicli
Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"
Fonte: dati forniti dai Centri relativi a PGS/PGD anno 2015
28 Centri Italiani PGD/PGS
Numero cicli
Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"
Cicli PGD (20 Centri)
Totale cicli PMA 2015: 18195
Totale cicli PGD 2015: 295
Percentuale: 1.62% (con picco massimo del 3, 3%)
Cicli PGD-A (18 Centri)
Totale cicli PMA 2015: 16895
Totale cicli PGS 2015: 2053 (età media 38,5 anni)
Percentuale media: 12.5% (con picco massimo del 61%)
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In sede (9)
Service (12)
Non dichiarato (4)
Laboratorio in sede o service
[3 in sede PGS/in service PGD]
Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"
Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015
CGH-array (PGS)
[8 di cui 4 in sede]
qPCR (PGD/PGS)
[9 di cui 2 in sede]
NGS (PGD/PGS)
[8 di cui 3 in sede]
Tecnologie utilizzate
*Più di una tecnica utilizzata per centro
Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"
SNP-array (trasl)
[9 di cui 1 in sede]
Karyomapping (PGD/PGS)
[1 – altro in attivazione]
Sanger-STR (PGD)
[2 di cui 1 in sede]
Non dichiarato
Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015
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Tavolo di Lavoro congiunto
per la stesura delle Linee Guida Italiane
per la Diagnosi Genetica Preimpianto
�Società scientifche:
�SIGU
�SIFES
�CECOS
�SIERR
�SIOS
�SIAMS
�SIDR
�Avv. G. Baldini (sentenze Legge 40/2004)
�Responsabile Registro Nazionale PMA (e PGD) dell'ISS
Legge 40/2004 e successive modifiche
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Fecondazione
SI - coppie eterosessuali sposate o conviventi in età fertile, infertili
NO - omosessuali, sigle, coniuge post mortem,
coppie oltre i limiti di fertilità, fertili
NO - fecondazione eterologa
TUTELA DEI DIRITTI DELL’EMBRIONE
� Solo 3 ovociti fecondabili
� Obbligo di impianto (revoca fino alla fecondazione)
� Impossibilità di esecuzione diagnosi pre-impianto
� Divieto di crioconservazione embrioni (no dei gameti)
� Divieto di ricerca scientifica (sperimentale) sugli embrioni
Legge 40/2004
Sentenze di riferimento sulla Legge 40/2004
- Tribunale di Cagliari Ordinanza del 09/11/2012
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Sentenze su legge 40/2004
Tribunale di Milano, Tribunale di Firenze, Tar del Lazio:
Possibile effettuare la diagnosi pre-impianto in caso di malattie genetiche (Talassemia)
Sentenza della Corte Costituzionale del 01/04/2009:
- Illegittimo comma 2 art. 14
- Incostituzionale comma 3 art.14
- Possibile inseminare più ovociti e produrre un numero di embrioni superiori a 3
- Possibile trasferire più di 3 embrioni, anche in impianti successivi, e dunque congelare gli embrioni
- Possibile effettuare la diagnosi pre-impianto sull’embrione e congelare gli embrioni patologici da non trasferire