L’emocromo è l’esame specialistico ed essenziale per

l’ematologo

Indica che:

• Il midollo produce un numero sufficiente di cellule mature di tutte le linee emopoietiche

• Lo sviluppo di ogni linea emopoietica è normale

EMOCROMO

• LA BUONA ESECUZIONE DEL PRELIEVO

• IL TEMPO DAL PRELIEVO• L’ANTICOAGULANTE IDONEO• QUANDO USARE Na-Citrato COME

ANTICOAGULANTE

AUTOMAZIONE IN EMATOLOGIA

I “citometri automatici” sono in grado di contare rapidamente un numero elevato di particelle e di valutarne le dimensioni

Per queste caratteristiche possono in un tempo molto breve fornire molti

parametri con qualità irraggiungibile dalle metodiche manuali

CONTATORE AUTOMATICO

CAMPIONE

Una porzione di sangue viene lisata per:

- misurare la concentrazione di emoglobina

- contare il numero di globuli bianchi

Una porzione di sangue viene diluita per:

- contare i globuli rossi

- misurare il volume dei globuli rossi

- contare le piastrine

ALYALY

LICLIC

HPXHPXNRBCNRBC IGIG

HPCHPC

AtypLympho

AtypLympho

PLT clumps

PLT clumps BLASTI

BLASTI

LUCLUC

GLOBULI ROSSI

PARAMETRI DIRETTI:• CONTEGGIO GLOBULI• DOSAGGIO Hb• MCV

PARAMETRI DERIVATI:• EMATOCRITO• MCH• MCHC

GLOBULI ROSSI

MCV = Mean Corpuscolar Volume (fl = femtolitro)

MCH = Mean Corpuscolar Hemoglobin (valore emoglobina/numero globuli rossi x 10)

MCHC = Mean Corpuscolar Hemoglobin Concentration (valore emoglobina/

valore ematocrito)

NOMENCLATURA

• ANISOCITOSI• ANISOPOCHILOCITOSI• MACROCITOSI• MICROCITOSI• IPOCROMIA• IPERCROMIA• MICROCITEMIA

CURVA DI DISTRIBUZIONE DEL VOLUME ERITROCITARIO

CITOGRAMMA ERITROCITARIO DI VOLUME E CONCENTRAZIONE DI

EMOGLOBINA

ipocromia

macrocitosi

ipercromia

microcitosi

MICROCITOSI

Globuli Rossi = 4.710.000/ulHGB = 10.6 g/dLMCV = 70.0 fL

MACROCITOSI

Globuli Rossi =2.820.000/μlHGB = 11,2 g/dLMCV = 121,4 fL

Densità (concentrazione Hb)Densità (concentrazione Hb)

VVOOLLUUMMEE

Y asse: VolumiX asse: densità celllulare

Macro

Micro

Ipo Iper

Analisi RBC: citogramma volume/concetrazione

RETICOLOCITI IN AUTOMAZIONE

PARAMETRO ESSENZIALE NELLA DIAGNOSI DELLE ANEMIE,ESPRIMONO LO STATO FUNZIONALE DELL’ERITROPOIESI

LA STRUMENTAZIONE AUTOMATICA PERMETTE UN CONTEGGIO ATTENDIBILE POTENDO ANALIZZARE UN NUMERO DI EVENTI SIGNIFICATIVO

RETICOLOCITI IN AUTOMAZIONE

METODO: COLORAZIONI (auramina O, arancio di tiazolo, oxazina, bleu di

cresile) evidenziano l’RNA dei reticolociti

PARAMETRI

% , VALORI ASSOLUTI, IRF

Analisi ReticolocitiH

igh

Ang

le (

5-15

deg

rees

)

Oxazine 750 AbsorptionGLOBULI ROSSIGLOBULI ROSSI RETICOLOCITIRETICOLOCITI

L : Retic maturi

M : Retic a maturazione intermedia

H : Retic più immaturi, com maggiore qtà di RNA

GATEDGATED

• •

2,98%

AUTOMAZIONE IN EMATOLOGIA:

- Contare correttamente le cellule normali

- Evidenziare la presenza di cellule patologiche

-Identificare le cellule patologiche

FORMULA LEUCOCITARIA

FORMULA LEUCOCITARIA IN AUTOMAZIONE

La presenza di cellule patologiche deve essere sempre confermata e valutata insieme a tutti i parametri dell’analisi dell’emocromo.

L ’identificazione del tipo di cellula patologica richiede ancor oggi l’uso di altri strumenti e/o di altre metodiche.

30 100 200 300 400 fL

Formula leucocitaria misurata con metodo impedenziometrico

Vo

l

ume

Attività perossidasica

Intracellular Peroxidase Flow Cytometric Analysis

1

2

34

5

Tecnologia Baso

MONO + LINFO

BLASTI

NEUTR + EOSINO

BASOFILI

LINFOCITOSI

LEUCOCITI = 16,600/μlLINFOCITI =12,100/μl

LUC= 14,0%

LEUCOCITI= 7.680

LEUCOCITOSI149,000/μl

LMC

Peripheral Blood

Peripheral Blood

Basophil granulocyte

CONTEGGIO PIASTRINE

IMPORTANZA DELLA BUONA ESECUZIONE DEL PRELIEVO

QUANDO NON E’ INDICATO L ’ANTICOAGULANTE EDTA

MPV = MEAN PLATELET VOLUME

PDW = PLATELET DISTRIBUTION WIDTH

PCT = PLATELETCRIT

SONO FORTEMENTE INFLUENZATI DALLE CONDIZIONI E DAL TEMPO DI

ESECUZIONE DEL PRELIEVO

PARAMETRI PIASTRINICI

METODO ADVIA

densità

volume

PIASTRINE = 2,000/μl

Conteggi piastrinici non attendibili si ottengono quando sono presenti aggregati, oppure

piastrine giganti,oppure microciti o frammenti di eritrociti o

leucociti

PIASTRINE 78,000/μlAGGREGATI PIASTRINICI

Men Women

Caucasiann=100

Afrocarribeann=51

Africann=65

Caucasiann=100

Afrocarribeann=51

Africann=50

White cell count* 5.7(3.6-9.2) 5.2(2.8-9.5) 4.5(2.8-7.2) 6.2(3.5-10.8) 5.7(3.3-9.9) 5.0(3.2-7.8)

Neutrophil count

3.2(1.7-6.1) 2.5(1.0-5.8) 2.0(0.9-4.2) 3.6(1.7-7.5) 3.0(1.4-6.5) 2.4(1.3-4.2)

Lymphocyte count

1.7(1.0-2.9) 1.9(1.0-3.6) 1.8(1.0-3.2) 1.8(1.0-3.5) 2.0(1.2-3.4) 2.0(1.1-3.6)

Monocyte 0.34(0.18-0.62) 0.33(0.18-0.52) 0.29(0.15-0.58) 0.30(0.14-0.61) 0.31(0.16-0.59) 0.28(0.15-0.39)

Eosinophil count

0.12(0.03-0.48) 0.13(0.03-0.58) 0.12(0.02-0.79) 0.13(0.04-0.44) 0.10(0.03-0.33) 0.10(0.02-0.41)

Platelet count 218(143-332) 196(122-313) 183(115-290) 246(149-374) 236(149-371) 207(125-342)

Ethnic differences in normal blood cell values

Hematological values for normal infants and children. Amalgamation of data derived from various sources, expressed as mean ± 2SD or

95% rangeBirth Day 3 1 month 2 months 3-6 months 1 year 2-6 years 6-12 years

Red cell countx 1012/l

6.0±1.0 5.3±1.3 4.2 ±1.2 3.7± 0.6 4.7± 0.6 4.5 ±0.6 4.6± 0.6 4.6 ±0.6

Hemoglobing/l

180 ±40 180± 30 140± 25 112± 18 126 ±15 126 ±15 125 ±15 135 ±20

Packed cell volume(PCV) l/l

0.60± 0.15 0.56± 0.11 0.43 ±0.10 0.35 ±0.07 0.35 ±0.05 0.34 ±0.04 0.37 ±0.03 0.40± 0.05

Mean cell volume (MCV) fl

110 ±10 105±13 104±12 95±8 76±8 78±6 81±6 86±9

Mean cell Hb (MCH) pg

34±3 34±3 33±3 30±3 27±3 27±2 27±3 29±4

Mean cell Hb conc (MCHC) g/l

330± 30 330± 40 330± 40 320± 35 330± 30 340± 20 340± 30 340± 30

Reticulocytesx 109 /l

120-400 50-350 20-60 30-50 40-100 30-100 30-100 30-100

White cell countx 109 /l

18±8 15±8 12±7 10±5 12±6 11±5 10±5 9±4

Neutrophilsx 109 /l

4-14 3-5 3-9 1-5 1-6 1-7 1.5-8 2-8

Lympocytesx 109 /l

3-8 2-8 3-16 4-10 4-12 3.5-11 6-9 1-5

Monocytesx 109 /l

0.5-2.0 0.5-1.0 0.3-1.0 0.4-1.2 0.2-1.2 0.2-1.0 0.2-1.0 0.2-1.0

Eosinophilsx 109 /l

0.1-1.0 0.1-0.2 0.2-1.0 0.1-1.0 0.1-1.0 0.1-1.0 0.1-1.0 0.1-1.0

Plateletsx 109 /l

150-450 210-500 210-650 200-550 200-550 200-450 180-400