Date post: | 01-May-2015 |
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Attivazione e deplezione selettiva
di linfociti antigene-specifici
DottorandaElisa Piscianz
TutoreDr. Marco Rabusin
Dottorato di Ricerca in
MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO
E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA
direttore: prof . A. Ventura
XXIV Ciclo
Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT)
trapianto
cellule del donatore
Ag virali altri Ag cellule staminali
attecchimento
ricevente
cellule infettate
GvI GvT
cellule tumorali
GvHD
celluledel ricevente
cellule target
Obiettivi dello studio
• attivazione delle cellule Ag-specifiche
• inibizione o killing delle cellule attivate
Identificare le condizioni migliori per:
Mettere a punto un metodo per
identificare e depletare
i linfociti T allo-reattivi
entro 48-72 ore
risparmiare le cellule resting
cellule allo-geniche da donatore
Mixed Leukocyte Reaction (MLR)
cellule stimolatrici linfociti responder
dal ricevente
LCL-EBV
cellule dendritiche
farmaci
Analisi:• vitalità: 7AAD• proliferazione: 3H-Thy, CFSE
allo-deplezione specifica
Farmaci
• Folate methabolism inhibitionMethotrexate (Genestier L, J Clinical
Investigation, 1998)
• JAK pathway inhibitionTasocitinib (Manshouri T, Cancer
Science, 2008)
• Membrane electron transport inhibitionPhenoxodiol (Herst PM, Haematologica,
2009)
• GSH depletion3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010)
• Proteasome inhibitionBortezomib (Blanco B, Blood, 2006)
Screening dei farmaci
3-HAA• metabolita Trp (IDO enzyme)• deplezione GSH• associazione con MnCl2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry,
2008)
tossicitàcellule resting
killing cellule attivate
Bortezomib• inibitore del proteosoma• compromette via IFk – NF-kB
3-HAA e MnCl2
Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011
stimolazione con LCL-EBV
deplezione con 3-HAA/MnCl2
vitalità: 7AAD
60 ore
proliferazione: 3H-Thy
3-HAA, MnCl2, Bortezomib
Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011
stimolazione con LCL-EBV
deplezione con 3-HAA/MnCl2/Bortezomib
vitalità: 7AAD
60 ore
proliferazione: 3H-Thy
Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci
MLR
MLR + 3-HAA/MnCl2
PHA
non stimolato
PHA + 3-HAA/MnCl2
non stimolato + 3-HAA/MnCl2
Test di re-stimolazione
stimolazione con DCs
deplezione con 3-HAA/MnCl2
re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd)
60 ore
vitalità : 7AAD
60 ore
proliferazione: CFSE
Conclusioni e prossimo futuro…
• metodo attuabile• somministrazione/associazione dei farmaci modulabile
• risposta a patogeni• Treg
emivita dei farmaci dopo deplezione