Date post: | 01-May-2015 |
Category: |
Documents |
Upload: | pasquale-carlucci |
View: | 218 times |
Download: | 2 times |
Difetti eritrocitari (enzimatici e di membrana)
parte 1
AM-UNIMI tbmadc 2
AM-UNIMI tbmadc 3
AM-UNIMI tbmadc 4
Difetti di glucosio-6-fosfato deidrogenasi
AM-UNIMI tbmadc 5
• Ruolo biochimico
• Ereditarietà
• Caratteristiche biochimico-fisiche
• Aspetti genetici
• Aspetti epidemiologici
• Patologia clinica
AM-UNIMI tbmadc 6
90 %
10 %
Ruolo biochimico
AM-UNIMI tbmadc 7
Mg++,pH 7
EDTA,pH 8.5,NADP+
G-6-P,30°C 60’,EDTA, pH 8
• 515 aa, 59.265 Da, 2 o 4 subunità, 1 NADP/subunità
AM-UNIMI tbmadc 8
AM-UNIMI tbmadc 9
Prevalenza Gd-• 400 x 106 (worldwide)• 0.5 – 25 % (media 7 % - max 25 %)
ITALIA
Lombardia-Piemonte 6 % Emilia-veneto 3.3 % Toscana-Lazio* 4.8 % * ~60% G6PDMed
Campania 4.3%Sicilia 1.0%Sardegna** CA 25 %
NU 10 % ** ~90 % G6PD Med
SS 9 %
MANIFESTAZIONI CLINICHE Emolisi (farmaci, infezioni)
FavismoIttero neonatale († 0.7-1.6%)Anemia emolitica cronica non sferocitica
AM-UNIMI tbmadc 10
G6PD, classi
< 1% Classe 1 Anemia emol. non sfer. cronica
~ 79% Classe 2 Grave deficit, <10% att. res.
~ 21% Classe 3 Moderato deficit, 10-60% att. res.
Classe 4 Attività normale
Classe 5 Aumento attività
> 440 varianti
(Montemuros, n=130, 1997 RBC Group)
AM-UNIMI tbmadc 11
Favismo
• 10-20 % dei soggetti Gd- che mangiano fave
• Differenze fave fresche/secche
• Fattori ambientali
• Ruolo del complemento
AM-UNIMI tbmadc 12
vicina
di-vicina
-glucosidasi
O.
+ O2-
ascorbato 0,1 mM
1 mM
AM-UNIMI tbmadc 13
Ittero neonatale
• Variabilità in frequenza e gravità in diverse popolazioni
• Determinanti genetici (varianti) ed ambientali (farmaci ossidanti)
• Età gestazionale
• Associazione deficit G6PD – sindrome di Gilbert
AM-UNIMI tbmadc 14
AM-UNIMI tbmadc 15
G6PD: caratteristiche genetiche
• Antica nella scala evolutiva
• Gene “housekeeping” [ ubiquitario, TATA box atipico (ATTAAAT), no CAAT box, alto contenuto in -GC-]
• X-Linked (trasmissione mendeliana, lyonizzazione)
AM-UNIMI tbmadc 16
• Gene Xq28, 18,5 Kb, 13 esoni, 12 esoni codificanti
• mRNA 2.269 nucleotidi, 69 nucleotidi in 5’ non tradotta, 1.545 nucleotidi in regione codificante, 655 nucleotidi in 3’ non tradotta
OMIM *305900, GenBank accession X 55448
AM-UNIMI tbmadc 17
AM-UNIMI tbmadc 18
AM-UNIMI tbmadc 19
Mutazioni definite nel gene della G6PD
• Missenso– Sostituzione di 1 nucleotide 107– Sostituzioni di 2 nucleotidi 8– Sostituzioni di 3 nucleotidi 1
• Delezione– 1 codon 4– 2 codon 1– 8 codon 1
• Non-senso 1• Sito di splicing 1
AM-UNIMI tbmadc 20
AM-UNIMI tbmadc 21
AM-UNIMI tbmadc 22
Correlazione genotipo-fenotipo
• Mutazioni nelle regioni codificanti instabilità della molecola, aumentata degradazione (esone 10, interazioni)
• Negli eritrociti anemia• Nei granulociti (varianti classe II) aumento
infezioni• Variabilità/fattori ambientali• Spostamento equilibrio dimero-monomeri
AM-UNIMI tbmadc 23
METODICHE ANALITICHE
• Spot Test (Fairbanks, Beutler)• Test Citochimico (Brewer)• WHO (G6PD-6PGD) - Sottrazione
- Inibizione• DNA (reverse dot-blot, enzimi di restrizione, ARMS,
sequenza)
• mosaicismo, riconoscimento eterozigote• intervalli di riferimento• determinazione attività dopo crisi emolitica
AM-UNIMI tbmadc 24
AM-UNIMI tbmadc 25
AM-UNIMI tbmadc 26
AM-UNIMI tbmadc 27
G6PD: caratterizzazione varianti
• Mobilità EF• Km (G6P, NADP)• % Utilizzazione 2-dG6P, d-Am NADP• Stabilità• Optimum di pH• Ki NADPH
AM-UNIMI tbmadc 28
Jacobasch, Molecular Aspects of Medicine. 17(2):143-70, 1996
AM-UNIMI tbmadc 29
STADI DELLA DIFFERENZIAZIONE
ERITROIDECFU-S
BFU-E
CFU-E
Proeritroblasto basofilo Eritroblasto Basofilo
Eritroblasto Policromatofilo Eritroblasto Ortocromatico
Reticolocita
AM-UNIMI tbmadc 30
letture consigliate1: Lancet. 2008 Jan 5;371(9606):64-74. Links
Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency.
Cappellini MD, Fiorelli G.Department of Internal Medicine, University of Milan, Policlinico, Mangiagalli, Regina Elena Foundation IRCCS, Via F Sforza 35, Milan, Italy. [email protected]
Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency is the most common human enzyme defect, being present in more than 400 million people worldwide. The global distribution of this disorder is remarkably similar to that of malaria, lending support to the so-called malaria protection hypothesis. G6PD deficiency is an X-linked, hereditary genetic defect due to mutations in the G6PD gene, which cause functional variants with many biochemical and clinical phenotypes. About 140 mutations have been described: most are single base changes, leading to aminoacid substitutions. The most frequent clinical manifestations of G6PD deficiency are neonatal jaundice, and acute haemolytic anaemia, which is usually triggered by an exogenous agent. Some G6PD variants cause chronic haemolysis, leading to congenital non-spherocytic haemolytic anaemia. The most effective management of G6PD deficiency is to prevent haemolysis by avoiding oxidative stress. Screening programmes for the disorder are undertaken, depending on the prevalence of G6PD deficiency in a particular community.
PMID: 18177777 [PubMed - in process]
AM-UNIMI tbmadc 31
letture consigliate
1: QJM. 2007 Dec 26 [Epub ahead of print] Links
Subjects expressing the glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient phenotype experience a lower cardiovascular mortality.
Cocco P, Fadda D, Schwartz AG.
Department of Public HealthOccupational Health SectionUniversity of CagliariItaly [email protected].
PMID: 18160416 [PubMed - as supplied by publisher]
AM-UNIMI tbmadc 32
1: Blood. 2008 Jan 1;111(1):16-24. Links
Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical perspective.
Beutler E.
Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency serves as a prototype of the many human enzyme deficiencies that are now known. Since its discovery more than 50 years ago, the high prevalence of the defect and the easy accessibility of the cells that manifest it have made it a favorite tool of biochemists, epidemiologists, geneticists, and molecular biologists as well as clinicians. In this brief historical review, we trace the discovery of this defect, its clinical manifestations, detection, population genetics, and molecular biology.
PMID: 18156501 [PubMed - in process]