GENERALITA’ SULLA CERTIFICAZIONE DELLE SEMENTI:
ANALISI DELLE SEMENTI
Hedysarum coronarium
C u cu rb ita p e po
Triticum dicoccum
T rifo liu m p ra te n se
Medicago sativa
H o rd e u m vu lg a re
Avena sativa
V ic ia sa tiva
CONTROLLI SOTTO SORVEGLIANZA UFFICIALECORSO DI FORMAZIONE 1
PARTE TEORICA – GENERALE
Rita ZecchinelliLaboratorio Analisi Sementi
Tavazzano (LO)
LE ANALISI DELLE SEMENTI
LE SEMENTI SONO PRODOTTI BIOLOGICI CARATTERIZZATI DA UN
GRADO INTRINSECO DI VARIABILITA’ CHE NON SI RISCONTRA NEI
MATERIALI INERTI.
Scopo delle analisi:ottenere risultati di analisi
RIPETIBILI e RIPRODUCIBILI
con il ricorso a procedureCORRETTE e STANDARDIZZATE
Metodi ufficiali nazionaliMetodi internazionali
LE ANALISI DELLE SEMENTI
IL CAMPIONAMENTO DELLE SEMENTI
Il miglior laboratorio, l’analista più esperto, ma……..
- campione rappresentativo del lotto: ⇒⇒⇒⇒ QUALITA’ DEL LOTTO
- campione non rappresentativo del lotto: ⇒⇒⇒⇒ QUALITA’ DEL CAMPIONE
ANALISI FISICHE: Purezza specificaRSEUmidità
ANALISI FISIOLOGICHE: Germinabilità
ANALISI GENETICHE: Identità varietalePurezza varietaleAnalisi OGM
ANALISI STATO SANITARIO:Patogeni trasmissibili per seme
LE ANALISI DELLE SEMENTI
CLASSIFICAZIONE
FINALITA’:
Certificazione sotto sorveglianza ufficiale
Scopi interni
LE ANALISI DELLE SEMENTI
CLASSIFICAZIONE
Esempio
Standard di
qualità per
le
sementi di
mais
soia
girasole
(dal DPR 1065/73)
Specie
Fac
oltà
ger
min
ativ
a m
inim
a
(% d
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puro
)
Pur
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Ave
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Cus
cuta
spp
1 2 3 4/5 6 7Zea mays 90 98 0 - -Glycine max 80 98 5 0 0 ©Helianthus annuus 85 98 5 0 0 ©
© = la determinazione del contenuto in numero di semi di Cuscuta spp non è necessariamente effettuata a meno che sussista un dubbio sul rispetto dellecondizioni di cui alla colonna 7
Ai fini della certificazione: le analisi debbono accertare i requisitiminimi di legge
LE ANALISI DELLE SEMENTI
Qualunque sia la finalità dell’analisi, per ottenere lo scopo di ottenere risultati affidabili e ripetibili, è necessario applicare metodi di campionamento e di analisi di provata efficacia, standardizzati, ufficiali:•D.M. 22-12-1992: “Metodi ufficiali di campionamento e analisi della sementi”•ISTA Rules
Metodi ufficiali nazionaliMetodi internazionali
GAZZETTA UFFICIALE DELLA REPUBBLICA ITALIANA
supplemento ordinario al n. 2 del 4 gennaio 1993
MINISTERO DELL’AGRICOLTURA E
DELLE FORESTE
DECRETO MINISTERIALE 22 dicembre 1992
METODI UFFICIALI DI ANALISI
PER LE SEMENTI
in corso di revisione: sottocommissione per i metodi ufficiali di analisi delle sementi
c/o MiPAF
Metodi internazionali
Germinabilità
Condizioni:Substrato, Temperatura, Umidità, Luce, Durata prova
+ trattamenti speciali
Scopo:determinare la
percentuale di
semi puri capaci
di produrre
germogli in grado
di svilupparsi
in piante complete
400 semi (4 repliche X 100)
Apparecchiature - Materiali:celle - armadi termostatici
capsule Petri - bacinelle
sabbia - carta
Purezza fisica
Scopo:determinare le percentuali (in peso) di
seme puro - semi estranei - materie inerti
2 sottocampioni o 1 campione Strumenti:tavolette
pinze
lenti
bilance
stereomicroscopio
Ricerca Semi Estranei
Scopo:valutare la presenza numerica di
specie diverse da quella in esame
2 sottocampioni
Strumenti:tavolette
pinze
lenti
bilance
stereomicroscopio
Analisi supplementari che comportano la germinazione del seme:
• analisi di germia (barbabietola)NB obbligatoria ai fini certificazione per le sementi
monogermi e di precisione
Altre analisiANALISI FITOPOATOLOGICHE SULLE SEMENTI
PER I “PATOGENI DI QUALITA’ “
Diaporthe phaseolorum Pseudomonas syringae pv glycinea
NB obbligatorie ai fini certificazione per le sementi di alcune specie
(sementi di Glycine max)
Altre analisi(non obbligatorie ai fini certificazione)
Analisi che comportano la germinazione del seme:
• energia germinativa• analisi del vigore, es Cold Test
(rif. ISTA Handbook of Vigour Test Methods)
Analisi di supporto nella verifica della caratteristiche genetiche:
• morfologia - peso 1000 semi • fluorescenza• grado di ploidia
Triticum dicoccumtetraploide (2n=28)
Triticum speltaesaploide (2n=42)
Altre analisi(non obbligatorie ai fini certificazione)
Analisi di supporto nella verifica della caratteristiche genetiche: elettroforesi
MARCATORI BIOCHIMICI• proteine di riserva • isoenzimi
• caratterizzazione delle nuove varietà
• valutazione di identità e purezza varietale
• controllo della stabilità genica nelle generazioni
• valutazione della formula dell’ibrido
Altre analisi(non obbligatorie ai fini certificazione)
Altre analisi(non obbligatorie ai fini certificazione)
Verifiche basate sull’analisi del DNA: marcatori molecolari
• Citoplasma normale � nessuna banda,• Citoplasma tipo T � una banda di 440 bp (primer CMS-T),• Citoplasma tipo C � una banda di 398 bp (primer CMS-C),• Citoplasma tipo S � una banda di 799 bp (primer CMS-S).
Gene rilevabile con sonde o
inneschi specifici che, in virtù
della sua presenza, caratterizza
in modo inequivocabile il tratto
di cromosoma sul quale si trova.
700 bp
400 bp
N
CM
S -C
CM
S -S
CM
S -T
Vantaggi:
- indipendenti dall’ambiente
- n° di loci teoricamente infinito
- indipendenti dallo stadio di sviluppo
- indipendenti dal tessuto
Verifiche basate sull’analisi del DNA:
analisi OGM
per verificare la
presenza/assenza
di sementi OGM in lotti
di varietà convenzionali
e, nel caso, per stimarne
il contenuto in termini
quantitativi.
Altre analisi(non obbligatorie ai fini certificazione)
QUALITÁ delle ANALISI e del LABORATORIO
Concorrono a determinare la qualità:
- ASPETTI TECNICI
- ASPETTI ORGANIZZATIVI
- ASPETTI FORMALI
- PROCEDURE DI CONTROLLO E DI VERIFICA
QUALITÁ delle ANALISI e del LABORATORIO
- ASPETTI TECNICI
• rappresentatività del campione prelevato dal lotto• idonea preparazione dei campioni di analisi• adozione di metodi di analisi validi, standardizzati• analisti esperti• attrezzature idonee
QUALITÁ delle ANALISI e del LABORATORIO
- ASPETTI ORGANIZZATIVI
• dimensioni• tipo e finalità delle attività• numero di campioni• personale (professionalità, specializzazione)• utenza (interna/esterna, richieste)
QUALITÁ delle ANALISI e del LABORATORIO
- PROCEDURE DI CONTROLLO
• personale• materiali• apparecchiature
- PROCEDURE DI VERIFICA
• risultati di analisi
- ASPETTI FORMALI
• certificato di analisi