MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA … · 2014. 4. 1. · MICROBIOLOGIA Y...

I

MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

1ª. Edición

Licenciatura en Nutrición

Dr. José Julio Tercero Alburo

México D.F. 2014

MANUAL PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

I

INDICE

Bloque 1. Procariontes y virus

1. Bioseguridad y lineamientos generales del laboratorio de microbiología

2. Microscopía

3. Tinciones y morfología microscópica

4. Medios de cultivo y morfología colonial

5. Crecimiento microbiano I (Redox, pH, Aw)

6. Crecimiento microbiano II (Temperatura)

7. Técnicas para el aislamiento e identificación de bacterias

8. Antimicrobianos

9. Virus

Bloque 2 Eucariontes

10. Hongos y levaduras

11. Protozoarios

12. Helmintos


II

OBJETIVOS DEL CURSO

Iniciar al alumno en el conocimiento de la biología básica de los microorganismos, por

medio del vocabulario, procedimientos de cultivo y conceptos teóricos y experimentales.

Para comprender la diversidad y el lugar que ocupan estos organismos dentro de los

seres vivos.

Conocer las características morfológicas, nutricionales, medidas de control, así como

desarrollar las capacidades para la manipulación de los mismos en el laboratorio, para

detectar la importancia que tienen por sí mismos y su importancia en las diferentes formas

con las que interaccionan con los humanos, otros organismos y el medio ambiente.


III

REGLAMENTO DE EVALUACION DEL CURSO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

I. El curso de microbiología y parasitología es Teórico-práctico

II. La calificación final de la materia será la suma aprobatoria de cada una de las

partes que integran el curso, es decir, 50% laboratorio y 50% teórico.

III. La calificación del curso, consta de:

• Asistencia en el laboratorio se requiere el 90%

• Desempeño en el laboratorio

• Informe de cada una de las prácticas

• Participación en clase

• Tareas

• Exámenes

IV. Los reportes de las prácticas serán entregados una semana después del término

de la práctica. Por cada día de retraso de la entrega del reporte se descontará un

punto de la calificación

V. Por cada práctica realizada en el laboratorio de microbiología general se deberá

entregar un reporte escrito de manera individual, el cual contendrá los siguientes

puntos:

• Introducción: con una extensión máxima de 1 cuartilla.

• Objetivos: debe incluir el “que” y “para que”.

• Diagrama de flujo de la práctica (con dibujos).

• Resultados: se presentarán en forma de tablas, gráficas, esquemas y

deben contener información de lo que se ilustra.

• Discusión: junto con los resultados son la parte más importante del reporte,

deben estar redactados de manera clara y sencilla, haciendo referencia a


IV

sus tablas, gráficas y dibujos. En caso de que los resultados obtenidos no

sean los esperados debe darse una explicación bien argumentada sobre

las posibles causas. Para poder hacer una buena discusión es

indispensable leer las referencias relacionadas con el tema de la práctica,

de manera que se tenga una mayor información. Es muy importante que

las referencias que se consulten sean citadas en el texto.

• Conclusiones: las obtenidas directamente de los resultados de la práctica.

• Cuestionario resuelto.

• Bibliografía: utilizar el formato APA.

VI. Los reportes deben elaborarse a MANO, preferentemente en hojas recicladas.

VII. La calificación del reporte corresponderá a la suma de las evaluaciones individuales de cada sección como se muestra en la siguiente tabla:

Sección Calificación máxima (puntos) Introducción 1 Objetivo 1 Diagrama de flujo 0.5 Resultados 2 Discusión 2 Conclusiones 1 Cuestionario 2 Bibliografía 0.5 Total 10


V

REGLAMENTO DE TRABAJO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y NORMAS BÁSICAS DE

BIOSEGURIDAD Como es sabido, el manejo de microorganismos representa por sí mismo un riesgo

potencial, en virtud de que estos podrían llegar a ser potencialmente patogénicos, motivo

por el cual se deberán seguir estrictamente las indicaciones que a continuación se

presentan.

NO se debe menospreciar el riesgo que representa el manejo de microorganismos, la

manipulación de substancias o de los mecheros de gas debiendo dar aviso inmediato al

profesor en caso de cualquier derrame o fuga que se detecte.

I. NO hay retardos; se tendrá como tolerancia un máximo de 10 minutos para la

entrada al laboratorio, transcurrido ese tiempo no se permitirá la entrada al mismo

bajo ninguna circunstancia.

II. Es obligatorio el uso de bata blanca de algodón, misma que deberá colocarse y

abotonarse ANTES de entrar al laboratorio y solo podrá quitarse cuando se esté

fuera del mismo.

III. No se permitirá la entrada a personas ajenas al laboratorio.

IV. Recogerse el cabello antes de entrar al laboratorio

V. Evitar el uso de objetos como: audífonos, manos libres, aretes muy largos, collares,

bufandas, gorras, piercing, etc.

VI. No se permite el uso de sandalias o zapatos abiertos o con tacón muy alto.

VII. La puerta del laboratorio debe mantenerse siempre cerrada

VIII. Se debe limpiar la mesa con productos antimicrobianos ANTES y DESPUES de cada

sesión de clase.

IX. Colocar los objetos personales en los lugares destinados para ello, en las mesas de

trabajo solo deberá estar el material exclusivo de la materia.

X. Queda ESTRICTAMENTE prohibido comer, beber, fumar, aplicarse maquillaje, el

uso de dispositivos electrónicos como celulares o reproductores, o introducirse

cualquier objeto a la boca.


VI

XI. El alumno tiene la responsabilidad de revisar con anticipación el calendario de

prácticas, para estar al tanto de las actividades de cada sesión, además de conocer

el material extra que debe traer para desarrollar la práctica.

XII. Conservar siempre el orden dentro del laboratorio.

XIII. Seguir cuidadosamente las indicaciones del profesor y del manual de prácticas, SI

NO ENTIENDE, PREGUNTE.

XIV. Cuidar siempre el equipo y mobiliario del laboratorio, dejarlo siempre acomodado y

limpio; en caso de algún daño, el responsable deberá responder por el mismo.

XV. Informar inmediatamente al profesor sobre cualquier incidente que ocurra, NO

intente solucionarlo.

XVI. Depositar en los botes de basura todo el material NO contaminado.

XVII. El material contaminado deberá colocarse en los recipientes especiales para este fin,

para su posterior disposición.

XVIII. Una vez finalizada la sesión de trabajo, se deberá colocar el material bajo las

indicaciones del profesor.

XIX. Todo material que se incube, deberá estar perfectamente identificado con los

siguientes datos: grupo, nombre del alumno, fecha, nombre del experimento y

nombre del microorganismo.

XX. Lavarse las manos ANTES y DESPUES de cada sesión de trabajo.

XXI. En caso de cualquier contingencia recuerde: NO CORRO, NO GRITO, NO EMPUJO.


Bloque 1. Procariontes y virus

BIOSEGURIDAD Y PROCEDIMIENTOS GENERALES DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

1

I. Introducción

Los profesionales del área de la salud por la naturaleza de sus actividades se encuentran expuestos a riesgos profesionales, ya que se encuentran interaccionando directamente con personas y materiales que potencialmente pueden poner en riesgo su salud.

Se conoce como peligro a todo lo que en un momento dado puede causar daño a la salud, como ejemplo tenemos a algunos microorganismos, substancias químicas, accidentes, hábitos, radiación; etc.; por otra parte, se conoce como riesgo a la probabilidad de que dicho peligro se presente en un momento y circunstancias dadas con el consecuente daño a la salud.

Dentro del laboratorio de microbiología, existen muchos peligros a los que se está expuesto, como son materiales de vidrio o punzocortantes, substancias químicas, gases inflamables, y los microorganismos vivos, lo que con lleva a que se deben seguir al pie de la letra todos los reglamentos y normas de seguridad que se emitan para evitar riesgos.

De manera general, se considera que todo microorganismo es potencialmente peligroso y por ello debe ser manipula siempre con todas las técnicas y materiales adecuados.

Se considera a la bioseguridad como: “las acciones y medidas de evaluación, monitoreo, control y prevención que se deben asumir en la realización de actividades con organismos, con el objeto de prevenir, evitar o reducir los posibles riesgos que dichas actividades pudieran ocasionar a la salud humana o al medio ambiente y la diversidad biológica”, es decir son todos los cuidados que se deben tener para reducir al mínimo el riesgo que implica el manejo de estos organismo.

Para ello la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha emitido el “Manual de Bioseguridad en el Laboratorio” en donde se concentran los lineamientos básicos que se deben seguir para el manejo de estos peligros y clasifica los riesgos de la siguiente manera:

PRÁCTICA NO.1

Bioseguridad y procedimientos generales en el laboratorio de microbiología.


2

Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo)

Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los animales.

Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)

Agentes patógenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas probabilidades de entrañar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la población, el ganado o el medio ambiente. La exposición en el laboratorio puede inducir una infección grave, pero existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces y el riesgo de propagación es limitado.

Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)

Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces.

Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)

Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fácilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces.

Existe un símbolo que a nivel internacional indica la presencia de materiales que potencialmente se consideran biológico-infecciosos, dicho símbolo tiene fue diseñado en la década de los 60´s con la finalidad de que fuera fácil de reconocer y que diera la idea de que se trataba de un peligro, por ello por lo general el fondo es de color rojo o amarillo.

Para cada nivel de riesgo, se necesitan instalaciones y materiales apropiados de acuerdo con el tipo de organismos que se manejen en el laboratorio.


3

Del mismo modo, en nuestro país existe una norma que nos indica las medidas y cuidados que debemos tener al momento de desechar este tipo de materiales, la Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental Salud ambiental Residuos peligrosos biológico-infecciosos clasificación y especificaciones de manejo.

II. Objetivos

• Conocer los conceptos básicos de la bioseguridad con los que debe

trabajar en un laboratorio de microbiología.

• Observar la importancia de la bioseguridad para un laboratorio de

enseñanza.

• Conocer el fundamento de los mecanismos de bioseguridad con los que

trabajara en el laboratorio.


4

III. Lista de materiales

− Mechero de gas

− Asa bacteriológica

− Campana de flujo laminar

− Bata de laboratorio

− Cubrebocas

− Lentes de seguridad

IV. Procedimiento

Instalaciones

Dar un recorrido por el laboratorio e indicar a que nivel de bioseguridad pertenece y que tipo de materiales e pueden manejar en el mismo.

Equipo

Se dará a conocer los fundamentos y el uso correcto de los diferentes equipos (campana de flujo, mecheros, mesas de acero, etc.) y estrategias que se tienen en el laboratorio de microbiología para el manejo de microorganismos.

V. Informe/ Cuestionario

1) Elaborar esquemas donde se indique el fundamento y la finalidad de uso de

cada uno de los equipos que se discutieron en la clase.

2) Indique la importancia de tener medidas de bioseguridad en el laboratorio de

microbiología.

3) De acuerdo con la NOM-087-ECOL/SSA1-2002 indique qué importancia

tiene el adecuado desecho de los materiales contaminados con

microorganismos y por qué son importantes para la salud pública y

ambiental.

VI. Bibliografía

• Organización Mundial de la Salud, 2005, Manual de bioseguridad en el

laboratorio. 3ª edición. Organización Mundial de la Salud, Ginebra.

• http://snics.sagarpa.gob.mx/certificacion/Paginas/Bioseguridad.aspx

http://snics.sagarpa.gob.mx/certificacion/Paginas/Bioseguridad.aspx


5

• NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental Salud ambiental Residuos peligrosos biológico-infecciosos Clasificación y especificaciones de manejo.

MICROSCOPÍA

6

I. Introducción

La capacidad del ojo humano es limitada, por ello es que la existencia de los microorganismos paso desapercibida durante muchos siglos, fue hasta el desarrollo de herramientas e instrumentos basados en lentes que aumentaran el tamaño de las cosas que se descubrió la presencia de estos. La palabra microscopio, deriva etimológicamente del griego mikros (pequeño) y skoopeo (observación) y fue acuñado en 1624 por Jean Faber, literalmente significa observar lo pequeño. Desde el punto de vista de la óptica, existen dos tipos de microscopio, un microscopio simple que consta de un solo lente (una lupa por ejemplo) y el microscopio compuesto que tiene más de uno (como un microscopio). El primero en observar a los microorganismos fue Robert Hooke, que observó hongos filamentosos a principios del siglo XVII, posteriormente el microscopio fue perfeccionado por Antonie van Leeuwenhoek que en 1667 fue capaz de observar protozoarios y bacterias. Actualmente existen diferentes tipos de microscopios, dentro de los cuales tenemos a los microscopios de luz, los microscopios electrónicos, los microscopios laser y los de efecto túnel; en donde, dependiendo de la fuente de energía se formaran imágenes de los especímenes a diferentes grados de resolución, es decir mientras más corta sea la longitud de onda de la fuente de energía (y por consiguiente mayor energía) mayor nivel de detalle se tendrá en la imagen que se obtenga. De manera general, los microscopios ópticos (funcionan con luz), son los que se usan mayormente en las ciencias biológicas. Esencialmente están compuestos por un sistema óptico, compuesto por las lentes, el condensador y el diafragma, así como la fuente lumínica; un sistema mecánico, el cual es el encargado de mover todas las piezas de la maquinaria y poder dirigir adecuadamente la observación, así como brindar soporte a todos los mecanismos.

PRÁCTICA NO.2

Microscopía

MICROSCOPÍA

7

Un factor importante en cada microscopio, es el límite de resolución, el cual se define como la capacidad que tiene el microscopio para diferenciar entre dos objetos que se encuentran cercanos.

Cada microscopio tiene de 3 a 4 lentes objetivos con diferentes aumentos que se nombran de la siguiente forma: lupa (4X), seco débil (120X), seco fuerte (40X) e inmersión (100X).

El aumento total que tiene un microscopio, se obtiene al multiplicar los aumentos que tiene el objetivo por los aumentos de los objetivos. En el esquema siguiente, se mencionan las principales partes de un microscopio compuesto binocular marca VELAB®: modelo VE-B3 como los que manejará en el laboratorio.

MICROSCOPÍA

8

MICROSCOPÍA

9

Es importante mencionar que para hacer observaciones con el objetivo de 100X, se debe utilizar aceite de inmersión, dicho aceite tiene la propiedad de igualar el índice de refracción del vidrio, de este modo los rayos de luz no se dispersan al atravesar el aire o el vidrio, con lo que se obtiene buenas observaciones.

II. Objetivo

• Conocer las partes, funcionamiento y cuidados que se deben tener para el manejo

correcto de un microscopio óptico.

• Observar las diferentes estructuras biológicas y comparar los aumentos de las

preparaciones.


• Microscopio óptico de campo luminoso

• Papel seda

• Aceite de inmersión

• Hisopos de algodón

• Preparaciones fijas de organismos procariontes y eucariontes.

IV. Procedimiento

Observar las partes de un microscopio y seguir el procedimiento indicado por el profesor para hacer un enfoque adecuado de las preparaciones. Hacer los esquemas de cada preparación a diferentes aumentos.

V. Informe/Cuestionario

1) Entra a http://www.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html y practica

el funcionamiento de un microscopio con este microscopio virtual.

2) Hacer un resumen del procedimiento que se debe hacer para lograr una

correcta observación.

3) Mencione otros dos tipos de microscopia que existan y que utilidad tienen.

4) Indique que usos y aplicaciones tiene la microscopía. 5) Mencione si importante darle algún tratamiento a la muestra para ser

observada al microscopio y de ser así indique por qué.

http://www.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html

MICROSCOPÍA

10

6) Haga los esquemas de las preparaciones que observo durante la práctica a

los diferentes aumentos en los que los observó.

VI. Bibliografía

• Prescot M.L., J.P. Harley y D.A. Klein (1999). Microbiología, 4ª ed, McGraw-Hill Interamericana, Madrid.

TINCIONES Y MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA

11

I. Introducción

La gran mayoría de los microorganismos carecen de color, por lo que no es posible observar con claridad su forma o agrupación. Para poder realizar una observación detallada de su forma es necesario teñirlos. A lo largo de la historia se han usado muchas substancias tanto naturales como sintéticas, para teñir tanto tejidos como microorganismos, observando que hay ocasiones en que los resultados al usar solo colorantes no son del todo satisfactorios, es por ello que se implementó el uso de otro tipo de substancias denominadas mordentes, las cuales ayudan a la tinción y la hacen más eficiente. Las tinciones no solo permiten observar células, en ocasiones, nos permiten apreciar estructuras internas, lo que ha propiciado el avance de la biología. Los colorantes dentro de su estructura molecular tienen generalmente dos partes, una llamada cromóforo que es la que le da color y otra llamada auxócromo la cual le ayuda a interacción con la superficie a teñir. Un paso fundamental, antes de aplicar cualquier técnica de tinción, es elaborar correctamente la preparación que puede ser de dos tipos: “en fresco”, en donde se coloca la muestra tal y como se obtiene de su fuente original para su observación, o una preparación fija , en la cual la muestra biológica debe sufrir un tratamiento para que conserve sus características morfológicas, a este proceso se le llama fijación; para fijar una muestra se aplican métodos físicos como el calor o la deshidratación, o productos químicos como etanol, ácido acético, formaldehido o glutaraldehído. Una tinción simple es aquella en la que solo se aplica un colorante, por lo general las soluciones de colorantes se hacen agua y a baja concentración. Existen además tinciones diferenciales, tinciones selectivas y tinciones vitales En el primer caso, se utiliza más de un colorante y permite diferenciar a las células teñidas por la afinidad de un colorante a alguna estructura específica, como la tinción de Gram.

PRÁCTICA NO.3

Tinciones y morfología microscópica


12

La tinción de Gram fue diseñada por Hans Christian Gram en 1884; y es actualmente una de las principales técnicas que se usan en la bacteriología para poder diferenciar a dos grupos taxonómicos, las bacterias Gram positivas y las Gram negativas. También existe otra llamada tinción de Ziehl-Neelsen que tiene un importante valor para el diagnóstico de la tuberculosis. Por otra parte, una tinción selectiva es cuando la técnica permite observar alguna estructura específica de una célula, ejemplo de esto es la tinción de Shaeffer y Fulton para visualizar esporas, o la tinción de Rojo Congo para observar la cápsula. Finalmente, existen otro tipo de tinciones en las cuales se tiñen microorganismos de modo que estos se mantienen viables, de modo que podemos observar sus movimientos o alguna otra característica especial, a esto se le llama tinción vital. Una vez que se ha hecho una buena preparación y se procede a su observación podemos encontrar que podemos describir muchas características de su morfología, donde podemos encontrar diversas características que se indican a continuación:


13

II. Objetivo • Aprender la técnica correcta para hacer un frotis a partir de un cultivo de

microorganismos.

• Aprender a elaborar una preparación en fresco.

• Elaborar preparaciones de microorganismos para teñirlas por diferentes técnicas y observar algunas características morfológicas.


• Microscopio óptico

• Papel seda

• Aceite de inmersión

• Portaobjetos

• Cubreobjetos

• Pipetas Pasteur

• Soluciones de cristal violeta, safranina, lugol, alcohol-acetona, azul de metileno y

verde de malaquita.

• Cultivo de Escherichia coli

• Cultivo de Staphylococcus aureus

• Cultivo de Bacillus sp.

• Suspensión de protozoarios

IV. Procedimiento

Preparación de los frotis

− Lavar y eliminar las cargas eléctricas del portaobjetos con la flama del

mechero.

− Colocar en un portaobjetos una gota de agua utilizando el asa bacteriológica.

− Esterilice el asa y espere a que se enfríe. Tomar una muestra pequeña del

crecimiento microbiano y colocarla junto a la gota de agua.


14

− Con movimientos circulares del asa, distribuir uniformemente la muestra de la

colonia sobre la superficie del portaobjetos.

− Fijar el frotis a la llama del mechero pasándolo rápidamente varias veces

sobre ésta. Evite que el portaobjetos se caliente en exceso.

Preparación en fresco.

− Lavar y eliminar las cargas eléctricas del portaobjetos con la flama del

mechero.

− Colocar en un portaobjetos una gota de la suspensión de protozoarios.

− Inmediatamente después, colocar un cubreobjetos evitando la formación de

burbujas.

− Observar al microscopio.

Tinción simple

− Cubrir un frotis de S. aureus con el colorante de su preferencia y esperar un

minuto.

− Eliminar el exceso de colorante y enjuagar con agua de la llave (seguir las

indicaciones del profesor).

− Dejar secar los frotis al aire.

Tinción de Gram

− Hacer un frotis mezclando E. coli y S. aureus

− Cubrir el frotis con cristal violeta durante un minuto.

− Enjuagar con agua de la llave.


15

− Cubrir el frotis con lugol durante un minuto.


− Agregar alcohol-acetona sobre el frotis hasta que se observe la aparición de

“hilos” de colorante y enjuagar con agua de la llave rápidamente (seguir las

indicaciones del profesor).

− Cubrir el frotis con safranina durante un minuto.


− Dejar secar los frotis al aire.

Tinción de Shaeffer y Fulton

− Cubrir un frotis de Bacillus megaterium con verde de malaquita y calentar

suavemente hasta la emisión de vapores durante 5 minutos, adicionar más

colorante para evitar que el colorante se seque.


− Cubrir con safranina y esperar un minuto.

− Enjuagar los frotis con agua de la llave y dejarlos secar al aire.

V. Informe/cuestionario

1) Hacer los esquemas de las diferentes preparaciones a los diferentes

aumentos.

2) Identificar en los esquemas que es lo que se está observando.

3) Describa cual es el fundamento de la técnica de Gram.

4) Indique que es una espora bacteriana.

5) ¿Qué tipo de microorganismos observó en la preparación en fresco?.

VI. Bibliografía

• Prescot M.L., J.P. Harley y D.A. Klein (1999). Microbiología, 4ª ed, McGraw-

Hill Interamericana, Madrid.

• Madigan M.T., J.M. Martinko y J. Parker. (1999). Brock Biología de los

Microorganismos, 8ª ed, Prentice Hall, Madrid.

MEDIOS DE CULTIVO Y MORFOLOGIA COLONIAL

16

I. Introducción

De manera normal, los microorganismos se encuentran en el medio ambiente

formando poblaciones mixtas, de este modo, tenemos que para poder estudiar a un

microorganismo en el laboratorio debemos ser capaces poder separarlo de otros, y

mantenerlo viable, a esto se le llama un cultivo puro o axénico, es decir una

población de microorganismos de la misma especie.

Para recrear las condiciones en las que el microorganismo sea capaz de sobrevivir y

multiplicarse, se usan los medios de cultivo, que son formulaciones semi-sintéticas

de ingredientes dentro de los cuales se encuentran presentes una fuente de

carbono, una de nitrógeno, y los micronutrientes necesarios para el correcto

mantenimiento del cultivo como pueden ser minerales y en algunos casos vitaminas

o cofactores.

Sin embargo el uso de medios de cultivo, no se limita a mantener un cultivo puro, si

no que tienen múltiples usos y en base a estos los podemos clasificar en:

Tipo de medio Funciones Ingredientes clave

Rico Permite el desarrollo de la mayoría de los microorganismos

Extracto de algún tejido vegetal o animal

Enriquecido Permite el desarrollo de

microorganismos con exigencias nutrimentales especiales

Sangre, vitaminas, huevo, mantequilla,

leche, etc.

Selectivo Dentro de su formulación, contiene

ingredientes que permiten eliminar a ciertas poblaciones de microorganismos

EMB, medio con antibióticos, etc.

Diferencial Dentro de su formulación, se encuentran ingredientes que permiten diferenciar a una población de microorganismos de

otra.

Colorantes, indicadores de pH, o indicadores de

óxido-reducción.

PRÁCTICA NO.4

Medios de cultivo y morfología colonial


17

A pesar de existir una infinidad de medios de cultivo para el laboratorio con

características especiales para cada tipo de microorganismo, se calcula que solo el

1 % de los microorganismos existentes es cultivable bajo condiciones de laboratorio.

Los medios de cultivos pueden ser además líquidos, semi-solidos o sólidos en

función de la concentración de agar que se utilice.

El agar-agar, es un polímero de galactosas que se extrae de las algas del género

Gelidium sp., Euchema sp. y Gracilaria sp., dicho polímero tiene la propiedad de que

al calentarse y luego enfriarse se torna gelatinoso, de ahí que también sea utilizado

como agente espesante en la industria alimentaria, además debido a su estructura,

es difícil que sea metabolizado por la mayoría de los microorganismos, por lo que es

ideal como soporte en medios de cultivo.

Una vez que hemos conseguido los microorganismos se desarrollen sobre la

superficie de un medo de cultivo, estos crecerán formando “colonias”, que son

acúmulos de crecimiento microbiano que provienen de una célula o un grupo de

células de la misma especie.

Al tratarse de microorganismos de la misma especie, dicha colonia presentara

características morfológicas muy particulares para cada tipo de microorganismo, la

descripción de estas características es lo que se conoce como “morfología colonial”

y es una herramienta fundamental en la microbiología para comenzar con la

identificación de los microorganismos con los que se esté trabajando; es importante

aclarar que la morfología colonial de una especie en particular cambiará

dependiendo el tipo de medio de cultivo en el que se esté observando por lo que es

importante antes de describir la morfología, indicar el medio de cultivo en el que se

está trabajando.

Se consideran de manera general 11 características para hacer una descripción de

la morfología colonial:


18

1. Tamaño: se describe en milímetros.

2. Color. Puede ser debido al medio de cultivo o a la producción de pigmento.

3. Forma: las colonias puntiformes son tan pequeñas que no se pueden

describir las otras características.

4. Bordes: se refiere al extremo de la colonia.

5. Elevación: se refiere a la forma que toma la colonia en relaciona la superficie

del agar.

6. Superficie. Se refiere a la apariencia de la colonia.

7. Aspecto: puede ser húmedo o seco.

8. Luz reflejada: puede ser brillante o mate.

9. Luz transmitida: puede ser transparente, translucida u opaca.

10. Producción de pigmento. Se refiere al pigmento sobre la colonia o cuando

este difunde por el medio.

11. Consistencia. Puede ser dura, suave, mucoide o friable. Esta es la última

característica que se debe describirse pues es necesario destruir la colonia

para observarla.

12. Otras. En ocasiones dependiendo del medio de cultivo se puede ver alguna

otra característica especial, hemólisis, proteólisis, etc.

II. Objetivo

• Reconocer los requerimientos nutrimentales que tienen los microorganismos.

• Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes y como se

preparan.

• Conocer las características y utilidad que tiene conocer la morfología colonial.


19

III. Lista de materiales • Frasco de medio BHI • Frasco de medio Agar base sangre • Frasco de agar EMB • Frasco de medio TSI • Cajas de Petri • Matraces Erlenmeyer de 500 mL • Tripie • Rejilla de asbesto • Guantes aislantes de calor • Autoclave • Tubos de 13X100 • Cultivo de Escherichia coli • Cultivo de Staphylococcus aureus • Cultivo de Bacillus sp.

IV. Procedimiento

Elaborar unas placas de agar, en base a las instrucciones de la etiqueta del medio de cultivo. Describir la morfología colonial de los microorganismos que se proporcionen durante la práctica de laboratorio. Inocular algunos medios de cultivo con las cepas proporcionadas y posteriormente describir los resultados.


I. En una tabla, describir la morfología colonial de los microorganismos

trabajados en clase con ilustraciones.

II. Hacer una lista de al menos 15 medios de cultivo diferentes e indicar para

que microorganismo se recomienda y cuál es su clasificación.

III. Indique que son los medios cromogénicos y cómo funcionan.

VI Bibliografía

• Madigan M.T., J.M. Martinko y J. Parker. (1999). Brock Biología de los Microorganismos, 8ª ed, Prentice Hall, Madrid.

CRECIMIENTO MICROBIANO I (REDOX, PH, AW)

20

I. Introducción

La tendencia de los compuestos químicos de donar o ceder electrones es lo que se

conoce como potencial de óxido-reducción, o potencial redox, es decir que mientras

mayor sea la capacidad de un compuesto orgánico de compartir electrones, más

reducido se encuentra, y al contrario mientras mayor avidez por electrones tenga

una molécula más oxidada está.

Este potencial es fundamental para los microorganismos, ya que de estas

reacciones, obtienen su fuente de energía, es decir oxidan por ejemplo la glucosa

para obtener energía, oxidándola con moléculas de oxígeno.

En base a sus requerimientos de oxígeno, podemos clasificar a los microorganismos

como aerobios (requieren O2), anaerobios facultativos (pueden crecen en presencia

o ausencia de O2) y anaerobios estrictos (necesitan estar en una atmosfera libre de

O2).

Por otra parte, el pH de unas solución, es la concentración de iones H+, es decir,

que tan ácido o alcalino se encuentra una solución, todos los microorganismos

tienen un intervalo de crecimiento dentro de la escala de pH, ya la presencia de

estos iones puede en algunos casos favorecer o no el crecimiento de los

microorganismos al interferir directamente en el estado de ionización de algunas

moléculas o en la construcción de gradientes electroquímicos.

De este modo podemos clasificarlos en acidofílicos (aquellos que necesitan un pH

bajo), neurofílicos (aquellos que viven a pH neutro) y alcalofílicos (los que necesitan

un pH alcalino).

PRÁCTICA NO.5

Crecimiento microbiano I (Redox, pH, Aw)


21

Finalmente, tenemos que la actividad de agua o Aw, es la cantidad de moléculas de

agua que se encuentran disponibles para ser aprovechadas por los

microorganismos y es una medida que está estrechamente relacionada con la

concentración de solutos en el medio.

Escala de óxido reducción y pH

En base a esto podemos clasificar a los microorganismos como xerofílicos (aquellos

que requieren baja Aw), sacarofílicos (aquellos que requieren grandes

concentraciones de azúcares) y halofílicos (los que necesitan grandes cantidades

de sal).

II. Objetivo

Observar el efecto que tiene el potencial Redox, pH y la Aw sobre el desarrollo de algunos microorganismos.


• Caldo BHI • Aceite mineral • HCl • NaOH • NaCl • Agar • Cajas de Petri • Matraces Erlenmeyer de 500 mL • Asas bacteriológicas • Mechero • Incubadora a 37°C • Tubos de 13X100


22

• Tubos de 16X150 • Gradillas • Tiras de papel pH • Balanza • Espátulas • Cultivo de Escherichia coli • Cultivo de Staphylococcus aureus • Cultivo de Bacillus sp.

IV. Procedimiento

Sembrar en los tubos de BHI ajustados con los diferentes parámetros físico-

químicos a E. coli, S. aureus y a Bacillus sp.

Posterior al tiempo de incubación, leer el crecimiento y estimar la cantidad

mediante el método de cruces (preguntar al profesor).

V. Informe

Elaborar graficas de los resultados obtenidos, en donde el la concentración de

sal, oxígeno o pH sean el parámetro del eje x y las cruces de crecimiento

microbiano el del eje y.

Interpretar como afecta cada parámetro al crecimiento microbiano,

fundamentándolo en base a su fisiología.

Indique que aplicaciones tienen cada uno de los parámetros revisados en la

práctica respecto al control de microorganismos en alimentos.

VI. Bibliografía



• Prescot M.L., J.P. Harley y D.A. Klein (1999). Microbiología, 4ª ed, McGraw-


CRECIMIENTO MICROBIANO II (TEMPERATURA)

23

I. Introducción

La temperatura, es uno de los factores ambientales más importantes que se

presentan en el medio ambiente, dicho parámetro afecta directamente a todas las

reacciones bioquímicas que deben llevar a cabo los microorganismos para su

metabolismo, cada microorganismo está adaptado a vivir en temperaturas de

acuerdo a sus necesidades, de este modo tenemos que se han encontrado

microorganismos que habitan debajo de la capa de hielo del ártico a temperaturas

de -10 °C hasta microorganismos que habitan en las chimeneas de volcanes

submarinos en donde las temperaturas exceden de 100 °C.

En base a la temperatura de crecimiento, podemos clasificar a los microorganismos

como estenotérmicos a aquellos que solo pueden sobrevivir en intervalos de

temperaturas muy estrechos como algunas bacterias del género Neisseria que solo

sobreviven de 30 a 38 °C y en euriotérmicos a aquellos que pueden sobrevivir en

intervalos grandes de temperaturas, como los del género Enterococcus que pueden

sobrevivir desde 0 hasta 44 °C.

De manera general, todos los microorganismos tienen las llamadas temperaturas

cardinales, es decir las temperaturas mínima, óptima y máxima a la cual se pueden

desarrollar, y en base a estas, podemos clasificar a los microorganismos de la

siguiente manera.

Psicrofílicos (donde su temperatura optima de crecimiento se encuentra por debajo

de los 10°C), mesofílicos (donde su temperatura optima de crecimiento se encuentra

entre 10 y 45°C), termofílicos (donde su temperatura optima de crecimiento se

encuentra entre 41 y 70°C) e hipertermofílicos (donde su temperatura optima de

crecimiento se encuentra entre 70 y 110°C).

PRÁCTICA NO.6

Crecimiento microbiano II (Temperatura)


24

II. Objetivo

Identificar los diferentes efectos que tiene la temperatura sobre el desarrollo de los microorganismos, así como las aplicaciones que esto tiene.


• Caldo BHI • Tubos de 13X100 • Incubadora a 37°C • Refrigerador • Termómetro • Baño de agua • Cultivo de Escherichia coli • Cultivo de Staphylococcus aureus • Cultivo de Bacillus sp.

IV. Procedimiento

Inocular 4 tubos de cada microorganismo.

Incubar a las diferentes temperaturas durante 48 horas. Refrigeración (4°C),

temperatura ambiente (20°C), temperatura corporal humana (37 °C) y baño María

a 45°C.

Posterior al tiempo de incubación, leer el crecimiento y estimar la cantidad

mediante el método de cruces (preguntar al profesor).


1) Elaborar graficas de los resultados obtenidos, en donde la temperatura sea

el parámetro del eje x y las cruces de crecimiento microbiano el del eje y.

2) Interpretar como afecta la temperatura al crecimiento de cada

microorganismo y clasificarlos.

3) Fundamentar que tipo de adaptaciones presentan los microorganismos para

sobrevivir a temperaturas extremas.


25

4) Indique que aplicaciones tiene la temperatura respecto al control de

microorganismos en alimentos.

VI. Bibliografía

• • Madigan M.T., J.M. Martinko y J. Parker. (1999). Brock Biología de los


• • Prescot M.L., J.P. Harley y D.A. Klein (1999). Microbiología, 4ª ed, McGraw-


TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

26

I. Introducción

Los microorganismos se encuentran presentes en todos los ambientes, son parte

fundamental de los ciclos biogeoquímicos y se asocian a muchos seres vivos. El

número de microorganismos presentes, puede variar en gran medida dependiendo

de las características de la muestra y en muchas ocasiones el conocer el número de

microorganismos que están presentes puede ser un indicador de un riesgo para la

salud, o de buena calidad del suelo por mencionar algunos ejemplos.

Pero no solo es importante el saber la cantidad de microorganismos presentes, en

muchas ocasiones es necesario sabes qué tipo de microorganismos están

presentes e incluso poder identificar con precisión de que microorganismos se trata

para poder tomar una decisión ya sea de salud o de control de saneamiento.

Por ellos es que existen técnicas que permiten estimar la carga microbiana por

gramo de muestra, como lo es la cuanta viable, en donde podemos estimar

mediante la técnica de diluciones seriadas la cantidad de microorganismos

presentes en una muestra, pero además podemos estimar de manera cualitativa el

tipo de microorganismos que están formando parte de la microbiota de dicha

muestra al identificar las diferentes morfologías coloniales presentes.

Del mismo modo, a partir de una muestra compleja, podemos llegar a aislar e

identificar microorganismos específicos, por medio del uso de medios de cultivo

selectivo y diferencial, tinción de Gram y por último el uso de pruebas bioquímicas.

Las pruebas bioquímicas, son medios de cultivo diferenciales que nos permiten

poder identificar un comportamiento fisiológico especifico de cada microorganismo,

PRÁCTICA NO.7

Técnicas para el aislamiento e identificación de bacterias


27

es decir podemos tener un perfil bioquímico de lo que el microorganismo puede o no

puede hace y de esta modo poder determinar a qué tipo de microorganismo se trata.

A todo el procedimiento de aislamiento e identificación se le llama marcha y va

dirigida específicamente a la búsqueda de microorganismos de interés clínico, o

económico.

II. Objetivo

Aplicar los principales métodos que existen para aislar, cuantificar e identificar

microorganismos


• Tubos de 13X100

• Caldo rojo de fenol

• Sacarosa

• Lactosa

• Manitol

• Agar de Kliger

• Citrato de Simmons

• Agar de lisina y hierro

• Agar SIM

• Caldo BHI

• Peptona de caseína

• Pipetas de 10 mL y de 1 mL

• Cajas de Petri

• Matraces Erlenmeyer de 500 mL

• Hisopos estériles

• Gradillas

• Asa bacteriológica

• Cultivo de Escherichia coli

• Cultivo de Staphylococcus aureus


28

• Cultivo de Bacillus sp

• Muestra de suelo

IV. Procedimiento

Para poder contar colonias aisladas es necesario diluir la muestra original, utilizando

diluciones en serie, el diluyente conserve una proporción decimal una vez que se le

agregue la muestra, es decir que el matraz o tubo conserve una parte de muestra

por diez de diluyente que puede ser agua destilada o una solución de NaCl al

0.85%, regulador de fosfatos pH 7 o agua peptonada 0.1 %.

En condiciones asépticas, pesar 10 g del suelo de jardín y colocarlos dentro del

matraz Erlenmeyer (siga las indicaciones del profesor). Agitar durante 10 segundos

cuidando de no mojar el tapón de algodón.

Con una pipeta estéril tomar una alícuota de 1 mL y transferir este volumen al tubo

de ensaye marcado con el número 2.

Agitar suavemente el tubo durante cinco segundos, cuidando de no mojar el tapón

de algodón. Con la misma pipeta tomar una alícuota de 1 mL del tubo 2 y transferirla

al tubo marcado con el número 3.

Repetir los pasos hasta completar los cinco tubos.

Con una pipeta estéril, tomar 0.2 mL del ultimo tubo y colocar 0.1 mL en una caja

Petri etiquetada con el mismo número. Repetir este paso con todas las cajas.

Sumerja la varilla acodada en el etanol que está contenido en la caja Petri de vidrio,

pásela por la flama del mechero y espere que se apague y enfríe. Disperse la

alícuota colocada en cada una de las cajas con agar (siga las indicaciones del

profesor).

Incubar a 28°C durante 48 horas.


29

Esquema representativo de la serie de diluciones

Sembrar por estría cruzada 3 cajas de Petri a partir de la primera dilución e incubar

junto a la demás cajas.

Sembrar las diferentes pruebas bioquímicas con los microorganismos

proporcionados siguiendo las instrucciones del profesor.

Transcurrido el tiempo de incubación, observar las colonias que crecieron en el agar

y contarlas.

Seguir los cálculos de acuerdo a las indicaciones del profesor con la siguiente

fórmula.

UFC/mL = número de colonias x (1/dilución) x (1/alícuota)

De acuerdo a las indicaciones el profesor, interpretar las pruebas bioquímicas y

obtener el perfil bioquímico de cada microorganismo.


1) Buscar los fundamentos de las pruebas bioquímicas utilizadas en la

práctica.

2) Indique por que el método de las diluciones es cualitativo y cuantitativo

3) Describa la morfología colonial de al menos 3 colonias diferentes.


30

4) Dibuje la morfología microscópica de las mismas 3 colonias teñidas por

medio de la técnica de Gram.

5) Reportar el número de UFC/g que contenía el suelo.

VI. Bibliografía



• Prescot M.L., J.P. Harley y D.A. Klein (1999). Microbiología, 4ª ed, McGraw-Hill

Interamericana, Madrid.

ANTIMICROBIANOS

31

I. Introducción

Debido a que existen muchos tipos de microorganismos y se encuentran distribuidos

por todas partes no existe un método para eliminarlos definitivamente de alguna

superficie, por ello el hombre ha desarrollado una serie de compuestos y

metodologías las cuales han ayudado a disminuir las cantidades de

microorganismos de lugares estratégicos como son los hospitales y la industria de

alimentos.

Dentro de estos compuestos tenemos la presencia de detergentes, desinfectantes a

base de metales o compuestos químicos como las sales cuaternarias de amonio

que tienen actividad contra microorganismos, sin embargo cada uno tiene

limitaciones en su uso y algunos bajo ciertas circunstancias pueden ser dañinos

para la salud.

También se ha desarrollado toda una serie de compuestos que ayudan a eliminar

microorganismos cuando estos se encuentran causando una infección, los

antibióticos son un grupo muy diverso de compuestos que pueden ser de origen

natural, semi-sintético o sintético cuya función es eliminar microorganismos en bajas

concentraciones sin ser tóxicos para las personas que los consumen.

El efecto que pueden tener todas estas substancias antimicrobianas puede ser de

dos tipos, microbicida es decir que mate directamente a los microorganismos o

puede ser microbiostático, en donde el microorganismo no muere pero de tiene sus

funciones fisiológicas.

PRÁCTICA NO.8

Antimicrobianos

ANTIMICROBIANOS

32

Los compuestos antimicrobianos además por su tipo de acción pueden clasificarse

en antimicrobianos de amplio espectro o de espectro reducido, en base al número o

diversidad de microorganismos que sea capaz de tener algún efecto.

Existen factores que afectan la acción de dichos antimicrobianos, como son

principalmente la concentración del mismo, factor crucial ya que en altas

concentraciones puede llegar a ser toxico y en muy bajas concentraciones puede no

tener efecto.

Cada tipo de compuesto antimicrobiano actúa a diferente nivel, es decir cada uno

tiene un mecanismo de acción diferente, es decir tienen una molécula o estructura

blanco de la bacteria donde ejercen su acción.

Existe un fenómeno llamado resistencia, que se da cuando un microorganismo que

era susceptible a la acción de un antimicrobiano cambia o genera una estrategia

para evitar que dicha substancia pueda dañarlo, principalmente se debe al uso

indiscriminado de este tipo de compuestos lo cual a la larga genera problemas de

salud pública.

II. Objetivo

Observar el efecto que tienen ciertos compuestos sobre el desarrollo de los microorganismos.


• Cajas de Petri • Agar BHI • Papel filtro • Perforadora • Tubos de 16X150 • Pipetas pasteur • Pinzas • Baño de agua • Vortex • Caja de multidiscos para Gram + y para Gram –

ANTIMICROBIANOS

33

• Solución de Cristal violeta • Solución de azul de metileno • Hisopos estériles • Cultivo de Escherichia coli • Cultivo de Staphylococcus aureus • Cultivo de Bacillus sp • Muestras de desinfectantes caseros

IV. Procedimiento

Sembrar masivamente a los microorganismos proporcionados en las placas de

Petri.

Colocar los discos impregnados con agentes antimicrobianos de manera

equidistante en condiciones asépticas.


Observar los resultados.

De la misma forma en 2 placas colocar los multidiscos según corresponda al tipo

de microorganismo.


1) Indique de manera genérica el mecanismo de acción que tienen los

compuestos a base de metales, detergentes y colorantes sobre los

microorganismos.

2) ¿Qué usos tendría cada uno de los compuestos usados en la práctica?

3) Investigue que es una “concentración mínima inhibitoria”

4) Describa 2 mecanismos de resistencia a antibióticos.

VI. Bibliografía • Madigan M.T., J.M. Martinko y J. Parker. (1999). Brock Biología de los


VIRUS

34

I. Introducción

La palabra virus proviene de acuerdo a su etimología tiene como significado

“veneno”, se conocen desde el siglo XIX y los definían como organismos tan

pequeños que no era posible evidenciarlos por medio de un microscopio y fue hasta

los años 30 que trabajando con la enfermedad del mosaico del tabaco un grupo de

varios investigadores por fin aislaron, purificaron y caracterizaron al agente causal

de dicha enfermedad, pero realmente fue hasta 1962 que por fin se describió

totalmente la composición y estructura de este agente.

Los virus son agentes que no tienen células, esencialmente están compuestos de

proteínas y material genético, no tienen organelos ni estructuras de locomoción,

cuando se encuentran fuera de una célula hospedadora se comportan como

particular inertes, no pueden producir energía ni consumirla, sin embargo al estar en

contacto con su célula blanco, se activan todos sus procesos metabólicos y se

multiplica a costa de la maquinaria celular del hospedero, tomando el control de sus

organelos y proteínas, generando posteriormente la muerte de la célula e infectando

a las vecinas, en otras palabras son parásitos intracelulares obligados.

PRÁCTICA NO.9

Virus

VIRUS

35

Actualmente, aún se discute si los virus son seres vivos o no, incluso hay

discusiones sobre si son los parásitos más evolucionados que existen o son los más

sencillos.

Los virus son altamente específicos en cuanto a su hospedero se trata, es decir un

virus de plantas no puede infectar a los humanos y viceversa; existen virus para

animales, plantas, hongos, bacterias, protozooarios bacterias y para arqueas.

Los virus, pueden causar enfermedades en prácticamente todos los organismos,

actualmente, son causa de una gran cantidad de enfermedades del hombre, su

tratamiento es difícil; mientras que en las bacterias algunos virus son esenciales

para su evolución por medo de un fenómeno de transferencia horizontal de ADN

llamado transducción.

Los virus a diferencia de las bacterias, no se pueden cultivar en medios sintéticos,

necesitan forzosamente células susceptibles a la infección para propagar el virus, es

por ello que se han diseñado modelos para el estudio de los virus, como embriones

de pollo, ratón lactante, cultivos celulares o el recuento de placas líticas según sea

el caso.

II. Objetivo

Observar indirectamente la presencia y efectos que producen algunos bacteriófagos

provenientes del medio ambiente.


• Cajas de Petri • Agar BHI • Filtros de membrana de 0.22 µm de poro, para jeringa • Jeringas estériles • Tubos de 13X100 • Hisopos estériles • Pipetas Pasteur • Pipetas de 10mL • Pipetas de 1mL • Incubadora a 37°C • Cultivo de Escherichia coli • Cultivo de Staphylococcus aureus

VIRUS

36

• Muestra de agua

IV. Procedimiento

Aislamiento de bacteriófagos.

Tomar su muestra de agua y filtrarla con papel filtro.

Succionar el filtrado con una jeringa y colocarle el filtro de 0.22 µm.

Colectar la suspensión de bacteriófagos.

Elaboración del césped bacteriano.

Sembrar masivamente cono un hisopo 2 cajas de Petri con cada uno de los

microorganismos proporcionados.

Dividir las cajas en cuadrantes.

Colocar una gota de la suspensión de bacteriófagos en cada cuadrante y dejar

secar.


Contar las placas líticas y hacer observaciones.

V. Informe 1) Indicar si se observan un solo tipo de placas líticas, y de no ser así explicar

a qué se debe.

2) Dibuje una partícula viral e indique sus partes

3) Indique tres aplicaciones benéficas que tienen los virus

4) Indique en base a qué y cómo se clasifican los virus

VI. Bibliografía



• Romero C.R. (2013) Microbiología y Parasitología humana. Bases

etiológicas de las enfermedades infecciosas y parasitarias. 3ª ed. Editorial

medica panamericana. México D.F.


VII. Bloque 2. Eucariontes

HONGOS Y LEVADURAS

I. Introducción Los hongos son microorganismos eucariontes, pueden ser unicelulares o

pluricelulares, que se multiplican por reproducción sexual o asexual, son organismos

heterótrofos que se alimentan por absorción, presentan pared celular pero a

diferencia de otros organismos está compuesta de quitina.

Se dividen para su estudio en dos grandes grupos, levaduras y hongos

filamentosos.

Están constituidos por células que pueden variar desde 1 hasta 30 µm las cuales

forman filamentos llamados hifas que presentan crecimiento apical, al conjunto de

hifas se le conoce como micelio y existen dos tipos, el micelio septado, en el cual las

hifas presenta delimitación entre célula y célula, y el micelio cenocítico, el cual no

tiene septos y se observan células multinucleadas.

El micelio puede ser de dos tipos, micelio vegetativo, que es aquel que lleva a cabo

todas las actividades metabólicas y se encuentra por lo general de manera

horizontal a la superficie, y el micelio aéreo, que es el que se prolonga hacia arriba

formando las estructuras de reproducción de estos organismos.

Dicho micelio especializado en la reproducción es conocido como conidióforo, en

donde se encuentran los conidios, es decir células de reproducción asexual de un

hongo, y por lo general presentan formas características según la especie y es

posible en algunos casos utilizar esta característica para su identificación.

Algunos otros hongos, presentan un micelio especializado llamado esporangio, en

donde se encuentran las esporas que son resultado de la reproducción sexual de un

hongo, y dependiendo del tipo de hongo por ejemplo las ascosporas y las

basidiosporas.

PRÁCTICA NO.10

Hongos y levaduras

HONGOS Y LEVADURAS

Son de crecimiento lento comparado con el de las bacterias y por lo general

presentan una alta tasa catabólica, es decir su nicho ecológico corresponde al

reciclaje de la materia orgánica, como degradadores.

Las levaduras en cambio, son por lo general unicelulares y se multiplican por medio

de reproducción asexual, llamada gemación.

Los hongos tienen importancia ya que producen una gran cantidad de

enfermedades en humanos, plantas y animales, aunque también hay algunos que

tienen aplicaciones como producir antibióticos, vitaminas y enzimas que son usadas

como aditivos en la industria alimentaria, también son usados como ingredientes en

la elaboración de algunos alimentos como quesos, cerveza y pan.

II. Objetivo

Identificar morfológicamente y por medio de su microestructura a algunos hongos.

III. Lista de materiales • Frasco de agar papa dextrosa • Cajas de Petri • Varilla de Vidrio • Bisturí • Glicerol • Portaobjetos estériles • Cubreobjetos estériles • Solución de azul de algodón • Incubadora a 28°C • Azul de algodón • Asa micológica • Barniz de uñas transparente • Tortilla, fruta, verdura o pan con moho • Cultivo de Saccharomyces cerevisiae

IV. Procedimiento

Elaborar un frotis a partir del cultivo de S. cerevisiae

Hacer una tinción simple con cristal violeta y con azul de algodón.

A partir de su alimento con moho, elaborar una preparación en fresco siguiendo las

instrucciones del profesor, tiñendo con azul de algodón.

HONGOS Y LEVADURAS

Observar las preparaciones al microscopio.

A partir de su muestra de moho, sembrar por duplicado en cajas de agar papa

dextrosa acidificado con ácido tartárico. Posteriormente cerrar las cajas con cinta

adhesiva.

Incubar a 28 °C durante 3 días. NO DESTAPAR LAS CAJAS.

Describir la morfología colonial en base a lo siguiente:

Textura: algodonosa, lanosa, vellosa, aterciopelada, granulosa, pulverulenta,

cremosa.

Superficie: plana, acuminada, plegada, cerebriforme, crateriforme, umbilicada.

Color. Anverso (micelio aéreo) y reverso (micelio vegetativo) pigmento difusible al

medio.


1) Describa y discuta las diferencias existentes entre las levaduras y los hongos

filamentosos.

2) Buscando imágenes en internet, y por medio de la morfología colonial, trate

de identificar el tipo de hongo con el que trabajo en clase.

3) ¿Qué es un microcultivo y para qué sirve?

4) Diga que aplicaciones tienen los hongos

VI. Bibliografía

• Madigan M.T., J.M. Martinko y J. Parker. (1999). Brock Biología de los Microorganismos, 8ª ed, Prentice Hall, Madrid.

PROTOZOARIOS

I. Introducción

Los protozoarios son un grupo heterogéneo de microorganismos eucariontes, que

para su estudio se dividen en 5 grandes grupos:

Mastigophora se refiere a organismos que tienen flagelos.

Sarcodinos son los organismos que se movilizan usando pseudópodos.

Apicomplexa son aquellos que poseen un complejo apical.

Ciliophora son los que tienen cilios.

Microspora se multiplican por medio de un tipo especial de espora.

Debido a la gran diversidad de estos microorganismos es difícil establecer

generalidades entre ellos, los hay de vida libre y de vida parasitaria, estos,

representan problemas de salud pública para humanos y animales.

Dentro de su ciclo de vida por lo general presentan una fase vegetativa y una fase

de resistencia que en algunos casas de le llama quiste.

Su reproducción puede ser asexual o sexual y algunos de ellos presentan dentro de

su ciclo de vida varios hospederos.

PRÁCTICA NO.11

Protozoarios

PROTOZOARIOS

II. Objetivo Observar algunos de los diferentes tipos de protozoarios y algunas de sus principales estructuras, por medio de su observación al microscopio.

III. Lista de materiales • Microscopio óptico • Preparaciones de protozoarios • Agua estancada • Cubreobjetos • Portaobjetos • Pipetas Pasteur

IV. Procedimiento

Seguir las indicaciones del profesor respecto a las observaciones que se harán de

las preparaciones fijas.

Tomar con la pipeta Pasteur una gota de la muestra de agua, y colocarla en el

centro de un portaobjetos.

Colocar un cubreobjetos sobre la muestra de agua evitando la formación de

burbujas.

Observar al microscopio.


1) Busque en la literatura que protozoarios representan un problema de salud

pública en México.

2) Dibuje el ciclo de vida de algún protozoario que sea transmitido por los

alimentos, e indique las medidas más importantes para su prevención.

3) En base a sus observaciones hechas, indique a que grupos de protozoarios

pertenecen al menos 3 de los organismos que presentaba el agua estancada.

4) ¿Para qué sirve el complejo apical de los Apiconplexa?

5) Indique como afecta al estado nutricional y de salud en general de un individuo

cuando se encuentra un protozoario en su organismo.

VI. Bibliografía

• Romero C.R. (2013) Microbiología y Parasitología humana. Bases etiológicas de

las enfermedades infecciosas y parasitarias. 3ª ed. Editorial medica

panamericana. México D.F.

HELMINTOS

I. Introducción

El termino helminto, se usa para hacer referencia a organismos pertenecientes al

reino animal, se dividen en dos grandes grupos, Platelmintos (gusanos planos) y

Nematelmintos (gusanos cilíndricos), los primeros a su vez, se dividen en trematodos

y cestodos.

Los trematodos, se caracterizan por ser hermafroditas, no tener celoma ni aparato

digestivo completo, de manera genérica se considera que tienen forma de “hoja”.

Los cestodos, son gusanos largos y delgados (en forma de cinta) que tienen su

cuerpo divido en segmentos llamados proglótidos, tampoco tienen celoma y son

hermafroditas.

Los nematodos, de manera genérica se dice que son gusanos más evolucionados, ya

que presentan celoma, tienen aparato digestivo completo y presentan dimorfismo

sexual, es decir que hay hembras y machos.

En general se considera que los helmintos, son un problema muy grande de salud

pública a nivel mundial, ya que muchos seres humanos están infestados y

continuamente se encuentran liberando huevecillos al medio ambiente.

De manera general, la identificación y diagnóstico de las enfermedades causadas por

estos organismos se hace por medio de la observación de características

morfológicas tanto de especímenes adultos como de huevecillos, por lo que obtener

una muestra adecuada es fundamental.

Los helmintos, de manera general tienen ciclos de vida complejos, donde se

involucran en algunos casos hasta 4 o 5 hospederos diferentes, mientras que

presentan múltiples estadios larvarios.

PRÁCTICA NO.12

Helmintos

HELMINTOS

HELMINTOS

II. Objetivo

Identificar los diferentes tipos de helmintos y algunas de sus principales estructuras por medio de su observación al microscopio.


• Microscopio óptico • Preparaciones de helmintos

IV. Procedimiento

Seguir las indicaciones del profesor en base a la explicación, y hacer los esquemas

correspondientes.


1) Indique que helmintos son considerados un problema de salud pública a nivel

mundial.

2) Diga cuales helminto son problema de salud pública en México.

3) Enliste las medidas de control para Ascaris sp.

HELMINTOS

4) Haga un cuadro comparativo donde aparezcan las principales diferencias entre

los helmintos.

5) Indique como afecta al estado nutricional y de salud en general de un individuo

cuando se encuentra infestado.

VI. Bibliografía • Romero C.R. (2013) Microbiología y Parasitología humana. Bases etiológicas

de las enfermedades infecciosas y parasitarias. 3ª ed. Editorial medica

panamericana. México D.F

ANEXOS

ANEXOS

MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO CALDO BHI

Infusión de Cerebro de

Ternera (a partir de 200 g) 12,5 g

Infusión de Corazón de

Res (a partir de 250 g) 5,0 g

D(+)-Glucosa 2,0 g

Peptona de Gelatina 10,0 g

Sodio Cloruro 5,0 g

di-Sodio Hidrógeno Fosfato 2,5 g

pH final: 7,4 ±0,2

EOSINA AZUL DE METILENO (EMB)

Eosina Amarillenta 0,4 g

Azul de Metileno 0,065 g

Lactosa 5,0 g

Peptona Bacteriológica 10,0 g

di-Potasio Hidrógeno Fosfato 2,0 g

Sacarosa 5,0 g

Agar 13,5 g

pH final: 7,2 ±0,2

AGAR TSI

Amonio Hierro(III) Citrato 0,5 g

D(+)-Glucosa 1,0 g

Lactosa 10,0 g

Peptona 20,0 g

Rojo de Fenol 0,025 g

Sodio Cloruro 5,0 g

Sodio Tiosulfato 0,5 g

Agar 15,0 g

REACTIVOS

CRISTAL VIOLETA

Cristal violeta 2g

Alcohol etílico 95% 20 mL

Oxalato de amonio 0.8 g

Agua destilada 80 mL

LUGOL

Yoduro de potasio 2g

Yodo en cristales 1g


ALCOHOL ACETONA

Acetona 50mL


SAFRANINA

Safranina O 0.25g



AZUL DE METILENO AL 5%

Azul de metileno 5 g


AZUL DE ALGODÓN

Solución A

Solución saturada de azul de anilina 10 mL

Glicerol 10 mL


Solución B

Agua 100 mL

Fenol 100 mL

Ácido láctico 100 mL

Glicerol 100 mL

Acido pícrico (solución saturada) 100 mL

VERDE DE MALAQUITA

Verde de malaquita 5 g


Date post:	31-Jul-2021
Category:	Documents
Upload:	others
View:	4 times
Download:	0 times

MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA … · 2014. 4. 1. · MICROBIOLOGIA Y...

Documents