Università degli Studi di FirenzeFacoltà di Agraria, Farmacia, Medicina e Chirurgia,

Scienze Matematiche Fisiche e Naturali

Corso di Laurea interfacoltà in Biotecnologie

Laboratorio di Terapie Cellulari e Servizio Trasfusionale

A.O.U Meyer Firenze

VALIDAZIONE DEL TEST RAPIDO DI VALIDAZIONE DEL TEST RAPIDO DI STERILITÀ SU PRODOTTI PER STERILITÀ SU PRODOTTI PER

TERAPIA CELLULARE ALL’INTERNO TERAPIA CELLULARE ALL’INTERNO DI UNA CELL FACTORY OSPEDALIERADI UNA CELL FACTORY OSPEDALIERA

Relatore: Dott. Giannecchini Simone (Dipartimento di Sanità Pubblica)

Correlatore: Dott. Bambi Franco (A.O.U Meyer)

Candidata: Valentina

Becherucci

I PRODOTTI PER TERAPIA I PRODOTTI PER TERAPIA CELLULARE (PTC)CELLULARE (PTC)

Definizione dell’ISS (2004): farmaci biologici innovativi basati su materiale

genetico, cellule e tessuti.

Le cellule staminali mesenchimali (MSC): un esempio di PTC con le migliori

prospettive di impiego clinico.

PECULIARITÀ: sono realizzati in singoli lotti ad uso autologo o allogenico e

prelevati all’interno di strutture sanitarie NON possono essere prodotti all’interno

di un’industria farmaceutica.

SOLUZIONI: possono essere prodotti in ambienti a contaminazione controllata

(CLEAN ROOMS) all’interno di strutture accademiche/ospedaliere altamente

qualificate (CELL FACTORY)

IL TEST RAPIDO DI IL TEST RAPIDO DI STERILITASTERILITA’’

ANNEX 1 GMP: Manufacture of sterile medicinal products la STERILITA’ del PTC è una delle caratteristiche fondamentali per il rilascio del prodotto finito

Test di Sterilità CLASSICO

Esecuzione in locali a contaminazione controllata Tempo di incubazione 14 giorni 2 Temperature 22,5°C e 32,5°C Torbidità della soluzione come indice

di positività

Test di Sterilità RAPIDO

Esecuzione in locali non classificati Tempo di incubazione 7 giorni 1 temperatura unica 35°C Automatizzazione del sistema

Il principio attivo di un PTC è rappresentato da MATERIALE VIVENTE: non si può garantire la sterilità con i metodi di sterilizzazione comune

SCOPO DELLA TESISCOPO DELLA TESI

Convalidare il test rapido di sterilità sui PTC con particolare attenzione

all’esecuzione della Performance Qualification dello strumento BactAlert 3D

® Biomérieux, sistema automatico per la rilevazione di contaminazione

microbica all’interno di prodotti di terapia cellulare ed emocomponenti

CONVALIDA DEL TEST RAPIDO

1)PERFORMANCE QUALIFICATION dello strumento

2)Validazione del test di sterilità sul prodotto finito (MSC in coltura)

PERFORMANCE QUALIFICATION PERFORMANCE QUALIFICATION (PQ)(PQ)

1) RIPRODUCIBILITA’

2) STABILITA’

3) EFFICIENZA

La QUALIFICATION è una fase della CONVALIDA di un sistema

Annex 15 GMP (Qualifica e convalida) DEFINIZIONE DI PQ: verifica

documentata che un sistema è in grado di adempiere in modo costante e

ripetitivo alle funzioni previste se sfidato sui limiti di funzionamento dichiarati.

Il buon esito di una PQ deve soddisfare 3 punti principali :

BACTALERT 3D ® BIOMÉRIEUXBACTALERT 3D ® BIOMÉRIEUX

Modulo di gestione

video

Modulo di incubazione

Lettore di codici a barre

I FLACONI I FLACONI 6 TIPI DI FLACONI SAGGIATI

1) SA + SN per rilevare contaminazione microbica in

campioni di sangue

2) BPA + BPN per rilevare contaminazione microbica in

concentrati piastrinici

3) FA + FN per rilevare contaminazione microbica in

campioni contenenti antibiotici

METODO DI RILEVAZIONE METODO DI RILEVAZIONE

Terreno di coltura

Dischetto di rilevazione pH

sensibile

LED

FOTOMOLTIPLICATORE

LUCE RIFLESSA

Tecnologia colorimetrica: i microrganismi crescono nel terreno

di coltura dei flaconi producendo CO2

L’abbassamento del pH determina il viraggio di

colore del dischetto da blu a giallo

NEGATIVO POSITIVO

METODICA PER IL SAGGIO DI METODICA PER IL SAGGIO DI PQPQ

1) Ottenimento di 2 concentrazioni note di 9 ceppi microbici e fungini

1 UFC/ml + 50 UFC/ml

Diluizioni scalari

Metodo Bioball ® Multishot 550

2) Inoculo delle concentrazioni note all’interno dei flaconi

Test di FERTILITA’ 50 UFC

Test di SENSIBILITA’ 50 UFC e 1 UFC

3) Semina su piastra dei flaconi positivi e successiva

identificazione con sistema automatico Vitek ®

Test di SPECIFICITA’

VALUTAZIONE della RIPRODUCIBILITA’ Test eseguiti su 3 lotti di

flaconi

TEMPO MASSIMO 168 h

TEMPO MEDIO RILEVATO 30,5 h

TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ 3 lotti della prova di Sensibilità a 50 UFC3 lotti della prova di Sensibilità a 50 UFC

TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ 3 lotti della prova di Sensibilità a 1 UFC3 lotti della prova di Sensibilità a 1 UFC

TEMPO MASSIMO 168 h

TEMPO MEDIO RILEVATO 37, 62 h

PERCENTUALE DI IDENTIFICAZIONE PERCENTUALE DI IDENTIFICAZIONE 3 lotti di flaconi del test di Sensibilità3 lotti di flaconi del test di Sensibilità

% Minima

Accettabile

(media)

-Bacilli 80%

-Tutti gli altri 90%

%Rilevata

-Bacilli 95,7 %

-Tutti gli altri 97,5%

%

VALUTAZIONE DELL’EFFICIENZA DELLO VALUTAZIONE DELL’EFFICIENZA DELLO STRUMENTO STRUMENTO

3 prove per il Test di fertilità

(84 flaconi totali)

-Risultati conformi = 100%

- Risultati non conformi = 0%

3 prove per il Test di Sensibilità

(432 flaconi totali)

Nelle 6 Prove totali

Falsi Positivi totali = 0%

Falsi Negativi totali = 0% Ripetizione dei risultati inattesi

CONCLUSIONICONCLUSIONILa Performance Qualification dello strumento è significativamente riuscita

Risultati RIPRODUCIBILI ,STABILI e CONFORMI a quelli attesi

Il BactAlert 3 D ® può essere utilizzato per l’esecuzione del test rapido di sterilità su prodotti per terapia cellulare

VANTAGGI1)RAPIDITA’ – SENSIBILITA’- AFFIDABILITA’

2)TRACCIABILITÀ dei campioni

3)Possibilità di IDENTIFICAZIONE affidabile dei campioni

positivi

4)Manipolazione minima e non distruttiva

Rilascio rapido del prodotto finito al

paziente + possibilità di intraprendere

azioni correttive tempestive