S. BernasconiC. TagliacarneGL. Marseglia
OUTLINE
1) Alcune considerazioni generali2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
OUTLINE
1) Alcune considerazioni generali2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali- interesse culturale
MASTER BIENNALE DI II LIVELLOLOW DOSE MEDICINE IN
PSICO-NERUO-ENDOCRINO-IMMUNOLOGIAApplicazioni in Medicina Generale, nelle Disfunzioni
Neuro-Muscolo-Scheletriche enell’ Healthy Aging
MASTER BIENNALE DI IILIVELLO
LOW DOSE MEDICINE EOMOTOSSICOLOGIA
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali- interesse culturale- ricerca scientifica
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali• 2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali• 2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine- concentrazioni attive molto basse
Inferiori alla «minimalpharmacologicaleffective dose».
EFFETTI DI DIFFERENTI CONCENTRAZIONI DI CITOCHINE
THERAPEUTIC EFFICACY
g (gram)= 1
10 -1 = 0.1
10 -2 = 0.01
mg (milligram)= 10 -3 = 0.001
μg (microgram)= 10 -6 = 0.000001
ng (nanogram)= 10 -9 = 0.000000001
pcg (picogram)= 10 -12 = 0.000000000001
fg (fentogram)= 10 -15 = 0.000000000000001
DEFINITIONS
S.K.A (Sequential KineticActivation)
Rappresenta unsofisticato DRUG
DELIVERY SYSTEM ingrado di rendere efficaci
concentrazionimolecolari al di sotto
della minimalpharmacological
effective dose.
S.K.A (Sequential KineticActivation)
Oggi si parla anche di RELEASEACTIVITY cioè la capacità della basic
substance di rilasciare nel mezzoacquoso la propria attività
farmacologicaBulletin of Experimental Biology and Medicine, Vol. 154, No. 1, November, 2012
SKA
H H
O
H H
O
H H
O
H H
O
H H
O
Acqua ordinaria
Acqua biologica
Con la dinamizzazionesi innesca il fenomenodi Frölich: la spazializ-zazione ordinata ditutti i dipoli, che portaall’abbassamento dellacostante dielettricacioè ad una più faciletrasmissione elettro-magnetica
HH
O
H H
O
104.5°
HH
O
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali• 2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine- concentrazioni attive molto basse- evidenze sperimentali
Effects of different doses of IL-1-β onisolated human fibroblasts
Expression of NFKb on isolatedfibroblasts
lps a c d b
1h
nfkblps a c d b
18h
Legend
•lps=control•A=placebo (water and alcohol)•B=pharmacological concentration•C=0.01pg/ml ska activated•D=0.01 pg/ml only diluted not ska activated
I RECETTORI TRANS-MEMBRANAUp- and Down-Regulation
TNF
Cell-surface receptor
Soluble TNF receptor
Cell activation
OUTLINE
• 1) Alcune considerazioni generali• 2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine- concentrazioni attive molto basse- evidenze sperimentali- patologia=alterata omeostasi
From: The Review of Diabetic Studies (2006) 3:72-75
Antigen presentation to naïve T cells results in the development of Th1, Th2 or Th17cells depending on the cytokine milieu.
Raphael I et al. T cell subsets and their signature cytokines in autoimmune andinflammatory diseases. Cytokine (2014), http://dx.doi.org/10.1016/j.cyto.2014.09.011
Neither good nor bad in Nature
OMEOSTASISALUTE
INFIAMMAZIONE
Cytokines UP• IL-1• IL-6• TNF-α• IL-17• INF-γ• IL-2• IL-8
Cytokines DOWN• TGF-β• IL-4• IL-10
ConcentrazioneFisiologica• IL-1• IL-6• TNF-α• IL-17• INF-γ• IL-2• IL-8
ConcentrazioneFisiologica• TGF-β• IL-4• IL-10
Th2
Th1
…IN IMMUNE “DEFICIENCY”
ImmunemodulatingCytokines
• TGF-β
• IL-4•IL-10Immunestimulating
Cytokines
• IL-2•IFN-γ•IL-1•GCSF
Th0
Th2Th1
IL-12, INF-γ IL-4
INF-γ DOWN-REGULATES
IL-12 UP-REGULATES IL-4 UP-REGULATES
IL-4 DOWN-REGULATES
Th subsets cross-regulate expansion and functionseach other.
- Cooke , A. Th17 in Inflammatory Conditions. 2006, Rev Diabetic Stud 3: 72-7- Bettelli E. et al. Th17: the third member of the effector T cell trilogy. Current Opinion in Immunology 2007, 19: 652-657
Inflammatory diseases Allergy
THE CONCEPT OF BALANCE – RECIPROCITY of TH CELLS
Antagonistic cytokines are utilized inorder to slow down a biological
effect; Same cytokines in order toenhance a biological function.
The concept of BALANCE and the useof SKA low dose cytokines
OUTLINE
1) Alcune considerazioni generali2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
OUTLINE
1) Alcune considerazioni generali2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
- razionale
IMMUNODEPRESSIONE POST-INFETTIVA
Convalescenza….………….
CITOMIX
CITOCHINE
LOW DOSE
VEGETALI
LOW DOSE
ESTRATTI D’ORGANOLOW DOSE
•GCSF
•IL1-beta
•INF -gamma
•IL-6
•IL-4
•IL-2INNESCO DELLARISPOSTAIMMUNITARIA
PROLIFERAZIONE DEIB E BOOSTING DELLEAPC (IL4);STIMOLAZIONE DEI T,B, NK (IL2)
•VASA LYMPHATICA SUIS
•MEDULLA OSSIS SUIS
•THYMULINE
STIMOLAZIONE DEI TESSUTIIMMUNOCOMPETENTI
AZIONE ANTISETTICA(Vaccinium vitis),
ANTINFIAMMATORIA(Ananassa sativa),
DI STIMOLAZIONE DEL SRE(Centella asiatica)
•VACCINIUM VITIS
•ANANASSA SATIVA
•CENTELLA ASIATICA
Criteri di inclusione
Bambini giunti all’osservazione c/o il
personale studio di Pediatria in qualità
di pazienti convenzionati con la ASL-8
Arezzo e privati, nel periodo compreso
tra 01.09.2007 e 31.10.2007.
Requisiti:
età compresa tra 3 ed 8 anni, positività
anamnestica per RRI [bambini che nel
periodo compreso tra novembre 2006 ed
aprile 2007 avevano manifestato più di 6
episodi di infezioni respiratorie acute].
Criteri di esclusione
Bambini affetti da patologia cronica
(diabete, cardiopatia, insufficienza renale),
in trattamento immunosoppressivo e
cortisonico, quelli sottoposti a terapia
antibiotica per lungo periodo e gli allergici.
CRITERI DI INCLUSIONE / ESCLUSIONE
PROTOCOLLO PREVENTIVO DELLE RRI E TERAPIA DEGLIEPISODI RESPIRATORI ACUTI (ARTI)
Il GRUPPO A è stato curato con CITOMIX con il seguente schema:
Δ=3.58
Δ=1.04
RICORSO ALLA TERAPIA ANTIBIOTICA
OUTLINE
1) Alcune considerazioni generali2) Alcuni fondamenti della low dose
medicine3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
- razionale- dati laboratoristici (studio pre-
clinico)
Pre-clinical Study
Evaluation of Citomix on PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells) of
15 healthy adult volunteers and on 15pediatric patients AMCs (Adenoidal
Mononuclear Cells) after adenoidectomysurgery.
PBMC
Prelievo di sangue da adulti sani15 volontari
Isolamento cellule
ATTIVITA’ IMMUNOMODULANTE DI CITOMIX
Adenoidi di soggetti pediatrici con infezioni ricorrenti15 soggetti
Isolamento cellule
AMC
Schiacciamento meccanico
PBMC Obiettivo:Attività NK
Analisi sottopopolazioni linfociti B e TProduzione di Citochine e Immunoglobuline
Analisi ex-vivo :Trattamento con
Citomix (soluzione) vs Terreno di coltura (RPMI)
Metodo:-Citotossicità
-FACS Analysis,-ELISA,
Citomix 1:10Basale
Colture cellulari
ATTIVITA’ IMMUNOMODULANTE DI CITOMIX
Citomix 1:100
AMC
SCOPO
Valutare l'attività immunomodulante "in vitro" di CITOMIX•PBMC di soggetti volontari adulti sani•cellule adenoidee di pazienti pediatrici.
Parametri immunologici:•capacità proliferativa di alcune sottopopolazioni linfocitarie (T e B)•attività NK•produzione di citochine e immunoglobuline.
RISULTATI
• In coltura CITOMIX non è tossico per lasopravvivenza e la proliferazione cellulare
Valutazione della capacità proliferativa linfocitariamediante marcatura con CFSE – SANGUE
PERIFERICO
0,005,00
10,0015,0020,0025,0030,0035,0040,0045,0050,00
CD3+CD8+ CD8+ CFSE-
% ce
lls
Proliferazione di linfociti T CD8+
BASALE
CITOMIX 1:10
CITOMIX 1:100
CANDIDA
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
CD3+CD4+ CD4+ CFSE-
% ce
lls
Proliferazione di linfociti T CD4+
BASALE
CITOMIX 1:10
CITOMIX 1:100
CANDIDA
Valutazione della capacità proliferativa linfocitariamediante marcatura con CFSE - ADENOIDI
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
35,00
40,00
CD3+CD8+ CD8+ CFSE-
% ce
lls
Proliferazione di linfociti T CD8+
BASALE
CITOMIX 1:10
CITOMIX 1:100
CANDIDA
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
CD3+CD4+ CD4+ CFSE-
% ce
lls
Proliferazione di linfociti T CD4+
BASALE
CITOMIX 1:10
CITOMIX 1:100
CANDIDA
RISULTATI
• In coltura CITOMIX non è tossico per lasopravvivenza e la proliferazione cellulare
•I dati suggeriscono una azione prevalente sulsistema innato
Valutazione dell’attività citotossica Natural Killer(NK)
PBMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100Rapporto 1:100 16,172 16,174 17,287
AMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100Rapporto 1:100 0,52 1,15 0,30
•Elevata variabilità inter- ed intraindividuale•Aumento dell’attività NK con citomix 1:10 nei linfociti da adenoidi, per poi tornare a livelli basali con laconcentrazione 1:100•Aumento dell’attività NK rispetto al basale con citomix 1:100 nei linfociti da sangue periferico
15,6015,8016,0016,2016,4016,6016,8017,0017,2017,40
BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100
% d
i lisi
Attività NK - sangue periferico
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100
% d
i lisi
Attività NK - adenoidi
Valutazione dell’attività citotossica Natural Killer(NK)
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
1,60
BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100
% d
i lisi
Attività NK - adenoidi
AMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100Rapporto 1:100 0.07 1.48 0.46D bas/stim 1.41 0.39
•Aumento dell’attività NK con citomix 1:10 e 1:100 nei linfociti da adenoidi•Aumento dell’attività NK rispetto al basale con citomix 1:10 e 1:100 nei linfociti da sangue periferico•Risultati non statisticamente significativi (Test T di Student)
Courtesy from Prof. G.L.. Marseglia
RISULTATI
•In coltura CITOMIX non è tossico per lasopravvivenza e la proliferazione cellulare•I dati suggeriscono una azione prevalente sulsistema innato•Basse concentrazioni di CITOMIX (1:100) sidimostrano in grado di stimolare laproduzione di citochine regolatorie…
Valutazione della produzione di CitochineSangue periferico
PBMC IL6 TNFalpha
BAS 105.57 70.33
1:10 96.36 75.70
1:100 160.24 117.00
0,00
20,00
40,00
60,00
80,00
100,00
120,00
140,00
160,00
180,00
IL6 TNFalpha
pg/m
l *
1x10
6ce
lls
Produzione di IL6 e TNFalpha dopo 10 gg in coltura - sangue periferico
BAS
1:10
1:100
Valutazione della produzione di CitochineSangue periferico
0,00
100,00
200,00
300,00
400,00
500,00
600,00
700,00
IFNgamma
Produzione di IFNgamma dopo 10 gg in coltura -sangue periferico
BAS
1:10
1:100
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
IL10
Produzione di IL10 dopo 10 gg in coltura - sangueperiferico
BAS
1:10
1:100
Aumento di IFNgamma e di IL-10 con la concentrazione 1:100 di citomix
CITOCHINE REGOLATORIEPBMC IFNgamma IL10
BAS 358.89 12.17
1:10 544.19 7.87
1:100 646.44 12.58
Valutazione della produzione di CitochineAdenoidi
ADENOIDI IL6 TNFalpha
BAS 843.55 2.72
1:10 792.97 3.67
1:100 671.06 3.17
0,00
200,00
400,00
600,00
800,00
1000,00
IL6
pg/m
l *
1x10
6ce
lls
Produzione di IL6 dopo 10 gg in coltura -adenoidi
BAS
1:10
1:100
0,000,501,001,502,002,503,003,504,00
TNFalpha
pg/m
l *
1x10
6ce
lls
Produzione di TNFalpha dopo 10 gg in coltura -adenoidi
BAS
1:10
1:100
Valutazione della produzione di Citochine –Adenoidi
0,00
50,00
100,00
150,00
200,00
250,00
IFNgamma
Produzione di IFNgamma dopo 10 gg in coltura -adenoidi
BAS
1:10
1:100
18,5019,0019,5020,0020,5021,0021,5022,0022,5023,0023,50
IL10
Produzione di IL10 dopo 10 gg in coltura -adenoidi
BAS
1:10
1:100
ADENOIDI IFNgamma IL10
BAS 91.59 21.34
1:10 215.42 20.34
1:100 219.81 23.14
Aumento di IFNgamma e di IL10 con la concentrazione 1:100 di citomix
CITOCHINE REGOLATORIE
• L’aumento di IFNgamma in presenza dicitomix rende le cellule dell’immunitàinnata pronte a debellare eventuali infezionivirali e l’IL-10 svolge azione regolatrice
• L’ aumento è maggiore con concentrazionipiù basse di citomix in coltura, adavvalorare l’ipotesi di un’azione sistemica dicitomix più che locale. Le citochineregolatorie prodotte stimolano edincrementano la risposta specifica dellecellule dell’immunità acquisita.
RISULTATI• In coltura CITOMIX non è tossico per lasopravvivenza e la proliferazione cellulare•I dati suggeriscono una azione prevalente sulsistema innato
•Basse concentrazioni di CITOMIX (1:100) sidimostrano in grado di stimolare la produzionedi citochine regolatorie e la produzione diimmunoglobuline (IgA. IgM, IgM)
Valutazione della produzione di immunoglobuline –Sangue periferico
0,00
100,00
200,00
300,00
400,00
500,00
600,00
700,00
800,00
900,00
IgA IgG IgM
g/m
l *
1x10
6ce
lls
Produzione di Immunoglobuline dopo 10 gg in coltura - sangueperiferico
BAS
1:10
1:100
PBMC IgA IgG IgM
BAS 109.76 244.19 498.82
1:10 48.10 52.94 268.84
1:100 262.18 594.14 828.83
PBMC IgA IgG IgM
BAS 109.76 244.19 498.82
1:10 48.10 52.94 268.84
1:100 262.18 594.14 828.83
Courtesy from Prof. G.L.. Marseglia
Studio clinico prospettico randomizzato con controllo attivosull’attività di un preparato composto ad azioneimmunomodulante nel controllo delle infezioni respiratoriericorrenti in età pediatrica: studio CIT-OM85-X
STUDIO CLINICO CIT-OM85-XSECONDA FASE