MET MEBMO
Mise en bloc
50° 70° 90° 100°Alcool
Imprégnation
Toluène
4h à 56ºC
Inclusion de la Paraffine
Paraffine
Coupe 5 um
Deparaffinage
15min
45º à 60ºC
Réhydratation
Eau
100º 90º 70° 50°
Toluène Alcool
Coloration
Formol
Inclusion en
rèsine plastique
Coupe 0,1 um
Contraste
uranium, plomb
Métallisation
or, platine
échantillons
massifs
But: Figer les tissus dans l’état le plus proche de leur état initial
le formol ou Le liquide de BOUINMoyens:
2-Fixation
3-Deshydration
Alcool
50° 70° 90° 100°
Toluène
4-Imprégnation
Alcool à 50ºEau Alcool à 100ºAlcool à 90º
Cellule Deshydratée
toluèneAlcool pure
3-Deshydration
Paraffine
fondue
5-Inclusion de la
paraffine
Séjour dans l’étuve:24h à 56°C
5-Inclusion de la paraffine
Paraffine
On coule la paraffine fondue contenant le prélèvement
imprégné de Paraffine entre les Barres de Leuckart.
6-Mise en bloc
A température ambiante, la
paraffine se solidifie en blocmoule constitué de 2 barres
platforme de paraffine fondue
Le prélèvement est imprégné de paraffine fondue
afin de le rigidifier pour pouvoir le couper ensuite
platforme de paraffine fondue
Paraffine
fondue
toluène
Paraffine
5-Inclusion de la paraffine
7- Confection de coupe histologique
A l’aide du scalpel on coupe le ruban qu’on récupère à l’aide du pinceau.
Des portions du ruban sont disposées sur un support en verre: la lame
Les lames avec le ruban de paraffine sont disposées
sur une platine chauffante
Elimination de la paraffine peripherique par chauffage
15 min à 45-60°c sur unr plaque chauffante.
8- Deparaffinage
AlcoolToluèneEau
9-Réhydratation
Étape assurant la réhydratation de la coupe
pour d’éliminer la paraffine intracellulaire et pouvoir colorer
10-Coloration
automate de rehydratation et coloration
100º 90º 70° 50°
Cuve de colorant Support de lames
automate de rehydratation et coloration10-Coloration
cytoplasme Acidophile
noyau Basophile
La regle de base implique un cytoplasme riche en protéine donc basique décrit acidophile (attire le colorantacide). le colorant de routine utilisé est l’éosine (rose).
épithélium tubaire de la trompe de fallope
cytoplasme acidophile rose
cytoplasme basophile
Si la cellule présente une forte activité de synthèse, donc forte activitétranscriptionnelle, le cytoplasme sera rempli d’ARNm rendant son pHacide donc basophile (coloré en violet par Hemateine).
tissu conjonctif avec des fibroblastes hyperactives, cytoplasme basophile violet
on remarque aussi le nucléole indicateur d’une chromatine decondensée = cellule de synthèse
HISTOCHIMIE10-Coloration
cytoplasme acidophile
Hématéine + Eosineune coloration nucléaire par l’hématoxyline,
et une coloration cytoplasmique par un mélange
de colorants acides (éosine)
Hématéine+Eosine+Safran(Coloration du collagène au Safran, associé à une coloration nucléaire par l’hématoxyline,
et une coloration cytoplasmique par un mélange de colorants acides (éosine)
TRICHROME DE MASSON(Coloration du collagène) au Vert Lumière ou Bleu d’aniline, associé à une coloration nucléaire par l’hématoxyline, et une
coloration cytoplasmique par un mélange de colorants acides (éosine)
TRICHROME DE MASSON AU BLEU D'ANILINE TRICHROME DE MASSON AU VERT LUMIÈRE
HISTOCHIMIE
Hématéine + Eosine
Bleu Alcianune coloration du mucus par révélation des
mucopolysaccharides acides en bleu
Rouge Mucicarminune coloration du mucus par révélation des
mucopolysaccharides acides en rouge
HISTOCHIMIE
Q/ Quels sont les colorants acides et basiques ?
Colorant PHCompartiment ou Substance
colorée
Hémateine Basique Noyau
eosine Acide Cytoplasme
safran neutre fibre de collagene
bleu d’aniline Basique fibre de collagene
Vert lumière acide fibre de collagene
bleu d’Alcian basique mucines acide (mucus)
rouge mucicarmin basique mucines acide (mucus)
orceine resorcine acide Fibres élastiques
Noir soudan acide Lipides (vacuole d’adipocyte)
Periodic Acid Schiff
PAS*
glycogene/mucine neutre/
Lipopigments
Von Kossa * Sels de Calcium
Ziehl * mycobcterie (tuberculose)
Gram * Bactéries - ou +
ZiehlGram
PAS
rouge
mucicarmin
bleu
d’Alcian
orceine
resorcine
HE HES
Trichrome de masson
* association de plusieurs colorant à pH variables
Noir soudan
IMMUNOHISTOCHIMIE
un anticorps est conjugué à une enzyme qui peut
catalyser une réaction de production de couleur au
niveau du site des complexes Ag- Ac
ENZYMATIQUE
IMMUNOHISTOCHIMIE
Mise en évidence de
l’insuline dans un
îlot de Langerhans
technique d’immunoperoxydase sur tissu pancréatique
IMMUNOHISTOCHIMIE
IMMUNOFLUORESCENCE
les anticorps peuvent aussi être marqués
par un fluorophore (immunofluorescence)
En cas d’hépatite virale B on utilise un anticorps anti-HBs marqué à
la fluorescéine : les hépatocytes contenant l'antigène HBs en excès
ont un cytoplasme vert positif
technique Immuno-fluorescence sur tissu hepatique
HBcAg stains bright green, nuclei stain blue with DAPI and telomeres stain pink.
11-Montage et Observation
Mise au point et observation au microscope optique
Baume de canada
Lamelle
Grossissement : Occulaire (x10) x Objectif (x4;x10;x40;x100)
Zonula occludens
=jonction serrée
=tight jonction
Zonula adhaerens
=desmosome en branche
=jonction intermediaire
Macula adhaerens
=Desmosome en tache
Macula communicans
=gap jonction
=nexusHémidesmosome
point de contact focaux
Membranes
adjacentes
Bandes de proteines
transmembranaires
Espace
extracellulaire
Espace extracellulaire
Filament d'actine
Desmosomes
plaque
Connexons
Espace extracellulaire
Membranes adjacentes
Intégrines (recepteurs proteiques
transmembranaires)
Ancrage C/LB
Etanchéité
communication
Ancrage C/C