Campionamento e analisi della densità cellulare di Ostreopsis cf. ovata
Gioia Benedettini, Patrizia Borrello, Patrizia Ciminiello, Enzo Funari, Erika Magaletti,
Maura Manganelli, Antonella Penna, Emanuela Spada, Cecilia Totti, Nicola Ungaro
Presentazione delle nuove Linee Guida per la gestione delle fioriture di Ostreopsis ovata e di cianobatteri nelle acque di balneazione, Roma, 20-21 Aprile 2015
Struttura del Capitolo
Introduzione
Matrice acqua
Campionamento e conservazione dei campioni
Analisi della densità cellulare
Matrice aerosol
Campionamento di aerosol per analisi chimica
Campionamento di aerosol per analisi molecolare
Matrice substrati bentonici
Metodo classico
Metodo della siringa
Metodo della Falcon
Bibliografia
Durata del campionamento
0.E+00
1.E+05
2.E+05
3.E+05
4.E+05
5.E+05
6.E+05
7.E+05
8.E+05
9.E+05
1.E+06
01-gen 01-feb 01-mar 01-apr 01-mag 01-giu 01-lug 01-ago 01-set 01-ott 01-nov 01-dic
Mar Ligure, Tirreno N Adriatico
cell
s g-1
fw
Matrice aerosol - Campionamento
Campionatori
• a frazione liquida
• a filtro
Campionatore SAS PCR della PBI International (a frazione liquida) per analisi chimiche
Campionatore portatile AirCube COM2 della Analitica Instrument (a filtro) per analisi molecolari
Matrice substrati bentonici – Trattamento dei campioni
Macroalghe:
agitazione del campione
leggera sonicazione
risciacqui
conservazione dell’acqua di risciacquo
rilevamento di peso fresco, peso secco e superficie
Substrato duro:
grattaggio
risciacqui
conservazione dell’acqua di risciacquo
misurazione della superficie
Matrice substrati bentonici – Analisi
Identificazione e conteggio secondo il metodo Utermöhl.
Abbondanze espresse come:
• substrati duri: cells cm-2
• macroalghe: cells g-1 ww, cells g-1 dw, cells cm-2
Matrice substrati bentonici – Metodo della siringa
20 ml
20ml
20ml
1
2
3
• Siringa modificata
• 3 repliche
• Per ogni replica prelievo di 20 ml in 3 punti
• Analisi al microscopio ottico
• Risultati espressi come cells ml-1 di campione siringa
Matrice substrati bentonici – Metodo della Falcon
• Prelievo di un frammento di tallo
• Stima del peso attraverso la differenza di volume
• Conteggio su 3 gocce (20 l) di volume noto
Abbondanza di O. ovata su A. taxiformis (n=36)
cell. /g macroalga
y = 0.9463x
R2 = 0.9306
0.0
50000.0
100000.0
0.0 50000.0 100000.0
metodo classico
me
tod
o a
lte
rnat
ivo
abb
revi
ato
N cell g-1fw Rischio
1 400
Basso 5 2000
10 4000
20 8000
30 12000
Medio
40 16000
50 20000
60 24000
70 28000
80 32000
Alto 90 36000
100 40000
150 60000
200 80000
Altissimo 500 200000
1000 400000
Altri metodi
da Tester et al 2014
Fiberglass screen fissati a una boa a 29 cm dal fondo.
Trasferimento in un barattolo, agitazione per favorire il distacco.
Concentrazione delle cellule su un filtro di 20 µm e aggiunta di 5-10 ml di FSW.
Analisi secondo Utermöhl.