Tecniche di preparazione e Tecniche di preparazione e conservazione degli conservazione degli
emocomponentiemocomponenti
Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006
Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL RavennaFranco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL Ravenna
DefinizioniDefinizioni prodotti del sangueprodotti del sangue
gli emocomponenti e gli emoderivatigli emocomponenti e gli emoderivati emocomponentiemocomponenti
i prodotti ricavati dal frazionamento del i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesisangue con mezzi fisici semplici o con aferesi
emoderivati emoderivati i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità medicinali estratte dall’emocomponente medicinali estratte dall’emocomponente
plasma mediante processo di lavorazione plasma mediante processo di lavorazione industriale industriale
Legge 21/10/2005, n° 219: Nuova disciplina delle attività trasfusionali e della produzione nazionale degli emoderivati
emocomponenti emocomponenti i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesifisici semplici o con aferesi
Eritrociti LeucocitiLeucociti PiastrinePiastrine Plasma Plasma
Emocomponenti di 2° livello
Sangue intero
•Terapia trasfusionale mirataTerapia trasfusionale mirata•Conservazione idonea di ciascun Conservazione idonea di ciascun componentecomponente
Eritrociti
LeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrine
Plasma Plasma
Centrifugazione + filtrazione
•Quantità raccolta•Emocomponenti non ottenibili da unità di sangue intero
Eritrociti LeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrinePlasma Plasma
Eritrociti LeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrinePlasma Plasma
Centrifugazione
2000 rpm 5-8 min
3500 rpm 15-20 min
Centrifugazione
Centrifugazione
Plasma Plasma
PiastrinePiastrine
LeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrine
•Emazie concentrate•Emazie concentrate private del buffy coat•Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive•Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive•Emazie lavate•Emazie leucodeplete•Emazie irradiate•Emazie congelate•Concentrato di emazie da aferesi
Eritrociti
Emazie concentrate
Emazie concentrate private del buffy-coat
2-6 °C 35 gg
Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni
additive
Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive
2-6 °C 42 gg
Emazie lavate
2-6 °C
Conservare il minor tempo possibile (<24 h se apertura del
sistema)
•Lavaggi con soluzione isotonica a 4 °C•Proteine < 0.3 g/unità
PNH – deficit IgA
Emazie leucodeplete
2-6 °C
•Filtrazione - Leucociti < 1x106
Emazie irradiate•25-50 Gy
Stessa durata del prodotto corrispondente (<24 h se apertura del sistema)
Irradiazione entro 14 gg dal prelievoTrasfusione entro 28 gg dal prelievo
Trasfusione entro 48 ore dall’irradiazione in
neonati o iperpotassemia
Emazie leucodeplete
•Riduzione alloimmunizzazione•Riduzione infezioni post-operatorie•Riduzione reazioni trasfusionali non-emolitiche•Riduzione GVHD•Riduzione trasmissione patogeni (CMV, CJD)•Riduzione mortalità post-operatoria (cardio-chirurgia)•Riduzione ospedalizzazione
Emazie congelate
Glicerolo 40% Glicerolo 15-20%
Entro 7 gg dalla raccolta
-60 -80 °C Azoto liquido (-150 °C)
Fino a 10 anni
Scongelamento
Deglicerolizzazione
Utilizzare nel più breve tempo possibile
•Concentrato granulocitario da aferesiConcentrato granulocitario da aferesi•Cellule staminali emopoietiche perifericheCellule staminali emopoietiche periferiche
LeucocitiLeucociti
Concentrato granulocitario da aferesi
Authors’ conclusions: ‘Currently there is inconclusive evidence from RCTs to support or refute the generalized use of granulocyte transfusion therapy in the most common neutropenic patient population’
Concentrato granulocitario da aferesi
•Mobilizzazione leucocitaria nel donatore (Steroidi o G-CSF)
Conservazione a 20-24°C per 24 hUtilizzare nel più breve tempo possibile
Granulociti da sangue intero (buffy-coat):•Utilizzati, prevalentemente in OE pediatrica, negli anni ‘80 •Abbandonati per inefficacia
Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da aferesi•Uso autologo o omologo•Preparazione del paziente/donatore (mobilizzazione CD34)
• Ciclofosfamide 4 g /m2 (autologo)• G-CSF s.c. per 4-5 gg
•1-2 procedure (2-3 ore) in giorni successivi
Conservazione a -80°C
Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Scongelamento a 37°C e impiego immediato
Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da cordone ombelicale•Facilità di prelievo•Necessità meno stringente di HLA-matching•Ridotta GVHD•Minore rischio di rigetto (blando condizionamento)
Conservazione a -80°C
Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Scongelamento a 37°C e impiego immediato
•Ridotto numero di cellule CD34 (pazienti pediatrici)•Espansione in vitro
•Concentrato piastrinico da aferesi•Concentrato piastrinico da plasma-piastrinoaferesi•Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero•Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat•Concentrato piastrinico lavato•Concentrato piastrinico irradiato•Piastrine crioconservate (da aferesi)•Gel piastrinico
Piastrine
PiastrinePiastrinePlasma Plasma
LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrinePiastrinePiastrine
Centrifugazione
2000 rpm 5-8 min
3500 rpm 15-20 min
Centrifugazione
Centrifugazione
Plasma Plasma
Concentrato piastrinico da singola unità di sangue interoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coatConcentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Sangue intero(20-24 °C)
•Fino a 5 gg dal prelievo•20-24 °C•Agitazione continua
Eritrociti Leucociti PiastrinePiastrine Plasma
•Concentrato piastrinico lavato•Concentrato piastrinico irradiato
•Congelamento entro 24 ore dal prelievo•Crioprotettore (DMSO)•Conservazione 1 anno a -80°C, 10 anni a -150°C•Utilizzo immediato dopo scongelamento
•Piastrine crioconservate (da aferesi)
•Come concentrati piastrinici
•Gel piastrinico
PiastrinePiastrinePlasma Plasma
LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti
PiastrinePiastrinePiastrinePiastrine
Centrifugazione
2000 rpm 5-8 min
3500 rpm 15-20 min
Centrifugazione
Centrifugazione
Plasma Plasma
Concentrato piastrinico da singola unità di sangue interoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
LeucocitiLeucociti
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coatConcentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Sangue intero(20-24 °C)
Gel piastrinicoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero•Autologo•Quantità di sangue intero variabile (30-50 cc)
Aggiunta di calcio e trombina
•Elevato contenuto di fattori di crescita degli α-granuli•Favorisce i processi di riparazione tessutale•Utilizzato in chirurgia maxillo-faciale, ortopedia, trattamento ulcere cutanee
Utilizzare nel più breve tempo possibile
•Plasma fresco congelato•Crioprecipitato•Plasma privo di crioprecipitato•Colla di fibrina
PLASMADERIVATI•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche•Immunoglobuline•Uso ev•Specifiche anti-HBV•Specifiche anti-tetano•Fattori della coagulazione
Plasma
Plasma fresco congelato
•Separato entro 6 ore (non oltre 18) dal prelievo•Congelamento a -30° completato entro 1 ora
•Congelato entro 6 ore dal prelievo•Tipo A (aferesi)•Tipo B (scomposizione)
•Congelato tra 6 e 72 ore dal prelievo
•Tipo C (scomposizione)•Albumina•Immunoglobuline•ATIII•FVIII•FIX•Complesso protrombinico
Plasma fresco congelato
Utilizzo per uso clinico entro•24 mesi se conservato ad almeno -25°C•3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
•Scongelato a 30-37°C con idonea strumentazione
•Utilizzato nel più breve tempo possibile•Entro 24 ore se conservato a 0-4°C
Plasma fresco congelato •Scongelamento a 1-6°C
CrioprecipitatoFVIII, FXIII, vWF, fibrinogeno, fibronectina
Plasma privo di crioprecipitato (cryosupernatant)vWF metalloproteasi (ADAMTS13)
Utilizzato nel più breve tempo possibileEntro 24 ore se conservato a 0-4°C
Ricongelamento entro 1 ora24 mesi se conservato ad almeno -25°C3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
Colla di fibrina
•Crioprecipitato (autologo)•Calcio + trombina
Utilizzato nel più breve tempo possibile
Congelamento24 mesi se conservato ad almeno -25°C3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
•Facilitazione della cicatrizzazione delle ferite chirurgiche•Azione favorevole sull’emostasi
Gel criopiastrinico•Crioprecipitato•Piastrine congelate •Calcio + trombina
Emoderivati (Plasmaderivati)
•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche•Immunoglobuline
•Uso ev•Specifiche anti-HBV•Specifiche anti-tetano
•Fattori della coagulazione
•Metodiche di precipitazione/purificazione•Metodi fisici (crioprecipitazione)•Metodi fisico-chimici (etanolo - Cohn)
•Metodiche cromatografiche•Gel-filtrazione•Cromatografia a scambio ionico e interazione idrofobica•Cromatografia ad affinità
Emoderivati (Plasmaderivati) – Riduzione rischio infettivo
•Pathogen inactivation technology
•Quarantena
donazione esami
Fase finestra
Pathogen inactivation
•Trattamenti al calore•Pastorizzazione•Trattamento al vapore•Dry heat
•Trattamenti sovente-detergente•TriNButylPhosphate – Tryton X100•Trattamento al vapore•Dry heat
•Nanofiltrazione•Trattamento al blu di metilene•Amatosalene - UV
•Perdita di proteine•Costo•Tossicità sul ricevente•Danno alle cellule
Pathogen inactivation
•Alchilanti (S-303, PEN110)•Riboflavina
Eritrociti
Piastrine •Psoralene - UV•Riboflavina - UV