Date post: | 02-May-2015 |
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Tecnologia del DNA ricombinante
Unità didattica per una IV liceo scientifico sperimentale
• Plasmidi e Coniugazione
• I Virus
• I Trasposoni
• La Tecnologia del DNA Ricombinante
Nella cellula batterica possono essere presenti piccoli anelli di DNA che portano poche informazioni -geni- i plasmidi.I plasmidi sono circolari, hanno DNA a doppio filamento e sono autoduplicanti.
Plasmidi e Coniugazione
Ogni cellula batterica può contenere un numero variabile di plasmidi.In E. coli è stata descritta una dozzina di tipi diversi di plasmidi tra cui i più importanti sono il plasmide F della fertilità e i plasmidi R della resistenza ai farmaci.
Plasmidi e ConiugazioneIl Plasmide F
• Primo plasmide ad essere identificato. (cellule F+)• 25 geni che controllano la produzione di strutture proteiche, i Pili.• La Coniugazione è il trasferimento di DNA da una cellula ad un’altra tramite contatto avvenuto grazie a queste strutture.•La cellula F- in questo modo diventa F+ e acquisisce la capacità d coniugarsi.
Plasmidi e ConiugazioneIl Plasmide F
Di particolare interesse è il fatto che il plasmide F piò integrarsi nel cromosoma batterico portando in una cellula ricevente parte del genoma batterico della cellula F+ il quale può ricombinare col cromosoma della cellula ricevente modificando la sequenza di DNA.
Plasmidi e ConiugazioneI Plasmidi R
• Sono plasmidi che contengono geni che conferiscono resistenza agli antibiotici.
• Possono passare da una cellula batterica ad un’altra, da un plasmide R ad un altro, possono integrarsi nel cromosoma batterico.
• Possono contenere fino a 10 geni per la resistenza ad antibiotici diversi.
I Virus
• Formati essenzialmente da un capside proteico che circonda una molecola di acido nucleico.
• Possono contenere DNA o RNA, a filamento singolo o doppio, circolare o lineare.
• Non è in grado di riprodursi da solo.
I Virus• Possono avere un ciclo litico o lisogenico (profagi).
I Virus• La trasduzione batterica.
•Può essere generalizzata o specializzata.
I Virus• Anche le cellule eucariote possono essere infettate da virus che possonoandare incontro a ciclo litico o lisogenico (provirus).
• Esempio virus HIV(virus a RNA).
I Trasposoni• Sono elementi genetici mobili ovvero segmenti di DNA che si spostano da una zona all’altra del cromosoma.
•Possiedono la trasposasi.
•Esistono trasposoni semplici e complessi.
•I trasposoni degli eucarioti sono simili a quelli dei procarioti
La Tecnologia del DNA ricombinante
• Scoperta della DNA-ligasi
• Scoperta degli enzimi di restrizione (estremità piatte o coesive)
Enzima BamHI
La Tecnologia del DNA ricombinante
• Clonazione del DNA
• Librerie genomiche
• PCR (polymerase Chain Reaction)
Primer Taq polimerasi
La Tecnologia del DNA ricombinante• Sequenziamento
didesossinucleotidi didesossinucleotidi fluorescenti
La Tecnologia del DNA ricombinante• Ibridazione