Post on 03-Mar-2021
transcript
3/1/2018
1
Bacili Gram negativi
• Patogeni– Salmonella– Shigella– Yersinia pestis– Tulpini patogene de E. coli: EAEC, ETEC, EHEC
• Patogeni oportunisti– E. coli
– Klebsiella– Proteus– Yersinia enterocolitica
Fam. Enterobacteriaceae
3/1/2018
2
Familia Enterobacteriaceae
Caractere generale:
• enterobacterium = bacterie intestinală
• habitat: tractul intestinal om/animale, piele, orofaringe, apa
3/1/2018
3
Caractere morfo-tinctoriale
• Bacili Gram-negativ
• Mobili/imobili
• Unii au capsulă: Klebsiella pneumoniae
• Nu formează endospori
Caractere de cultură
• Facultativ anaerobe • Tulbură uniform mediul de cultură lichid• Au necesităţi nutriţionale reduse → se dezvoltă şi pe
geloză nutritivă • Colonii tip S• Uneori colonii mucoase: Klebsiella pneumoniae • Medii selective, majoritatea au lactoză:
• Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert, MacConkey
3/1/2018
4
Mediul Levine
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + eozină + lactoză + albastru de metilen
• Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)
ADCL (Leifson)
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + săruri biliare + lactoză + roşu neutru
• Utilizare: cultivarea shigelelor şi salmonelelor
3/1/2018
5
Caractere biochimice
~ Încadrarea în familie pe baza a trei teste biochimice:• Fermenteză glucoza cu producere de acid şi gaz • Testul oxidazei negativ• Reduc nitraţii la nitriţi
~ Pe baza testelor biochimice şi a caracterelor an genice → genuri → specii → variante serologice
3/1/2018
6
Degradeaza oxidativ si fermentativ glucoza
3/1/2018
7
OXIDAZA
• Scop: evidentiereacitocromoxidazei
• Substrat: benzi indicatoare(alfanaftol- clorhidrat de dimetilparafenilendiamina)
• Tehnica:- se umecteaza banda
indicatoare cu apa distilata- se descaraca o colonie
bacteriana cu ajutorul ansei pebanda indicatoare
• Interpretare: test+ coloratiealbastra
Reducerea nitratilor la nitriti
• Substrat: apa peptonata + KNO3
• Incubare: 24h la 37 C
• Substanta indicatoare: ac sulfanilic/acid acetic, alfanaftilamina/ac acetic
• Interpretare: test + viraj spre rosu al indicatorului (Enterobacteriaceae)
3/1/2018
8
• Patogeni– Salmonella– Shigella– Yersinia pestis– Tulpini patogene de E. coli: EAEC, ETEC, EHEC
Enterobacterii patogene
Genul Shigella
• patogen intestinal• determină dizenterie bacilară:
– febră, – colici abdominale, – scaune diareice muco-sanguinolente
3/1/2018
9
Clasificarea Shigella
In functie de antigenul somatic O:
• Shigella dysenteriae (grup A)
• Shigella flexneri (grup B)
• Shigella boydii (grup C)
• Shigella sonnei (grup D)
Clasificarea Shigella
In functie de alte antigene :
~ Shigella dysenteriae: 12 tipuri antigenice
~ Tipul 1 = S. dysenteriae Shiga: produce exotoxina Shiga
~ Tipul 2 =S. dysenteriae Schmitzii
~ Tipul 3-12= S. dysenteriae Large Sachs
~ Shigella flexneri: 6 tipuri antigenice
~ Shigella boydii: 23tipuri antigenice
~ Shigella sonnei: 1 tip antigenic
3/1/2018
10
ShigellaRecoltarea produselor patologice
• Materii fecale: in coprorecoltoare sterile, cu mediu de transport
• Cât mai aproape de debutul bolii• Înaintea instituirii tratamentului antimicrobian• Mediu de transport:
- Cary-Blair- Stuart
Shigella Examenul microscopic din produs patologic
- Nu oferă informaţii relevante- preparatul na v între lamă şi lamelă →
polimorfonucleare şi eritrocite
3/1/2018
11
CoproculturaIzolarea
- Medii de îmbogăţire: - Mediul cu selenit acid de sodiu
- Medii de cultură pentru enterobacterii - Medii selective şi de diferenţiere
* Drigalski* Levin* Leifson* Istrate-Meitert* MacConkey
Shigella Caractere morfo-tinctoriale
Bacili Gram-negativ
3/1/2018
12
Shigella Proprietăţi de cultură
• Colonii S • Lactozo-negative
Shigella Proprietati biochimice
Mediul TSI: degradeaza fermentativ glucoza (coloana de mediu vireaza spre galben), este un bacil lactozo-negativ (panta mediului ramane rosie)
3/1/2018
13
Utilizarea citratului simmons
• Substrat: mediu minimal cu citrat de sodiu solidificat in eprubeta in pozitia inclinata
• Tehnica: inocularea bacteriei de testat pe panta agarului. Incubare 18h la 37 C
• Interpretare: test +dezvoltarea coloniilor bacteriene si viraj verdealbastru al culorii mediului
mediul Simmons
Shigella Structura antigenică
- Aglutinări pe lamă cu seruri anti-O
3/1/2018
14
ShigellaTestarea sensibilitatii la antibiotice
Ampicilina,Imipenem, MeropenemCafalosporineChinoloneAminoglicozideTrimetoprim-Sulfamethoxazol
Genul Salmonellapeste 2200 serotipuri
Infecţii (salmoneloze):
~ Febra tifoidă – Salmonella typhi~ Febra paratifoidă – Salmonella paratyphi A, B~ Toxiinfecţii alimentare şi enterite
Salmonella typhymuriumSalmonella enteritidisSalmonella paratyphi BSalmonella panama
~ Stări septico-piemiceSalmonella paratyphi CSalmonella choleraesuis
3/1/2018
15
Genul Salmonella - clasificare
• In functie de antigenele O, H, ViSpeciile cele mai importante din punct de vedere medical:• Salmonella typhi – sursa doar omul• Salmonella paratyphi - sursa doar omul• Salmonella typhimurium• Salmonella enteritidis• Salmonella choleraesuis
Subclasificate in sute de serotipuri
Salmonella Caractere generale
~ bacili Gram-negativ
~ mobili (flageli peritrichi)
~ lactozo-negativi
~ identificarea antigenelor O, H, Vi → reacţii de aglutinare
3/1/2018
16
• Endotoxina
• Capsula = antigenul Vi• Aderenta (fimbriae)• Invazivitate (proteina)
Genul Salmonella – principalii factori de virulenta
Genul Salmonella Infectii produse
A. Salmoneloze majoreFebra tifoida si paratifoida- Salmonella typhi si S.paratyphi A, B
B. Salmoneloze minore (gastroenterite acute, toxiinfectii alimentare )
• Salmonella typhimurium, S.enteritidis
3/1/2018
17
Salmonella – posibile surse de contaminare
Recoltarea produselor patologice
1) Febre tifo-paratifoide:
– Saptamana 1 sange pentru realizarea de hemoculturi
– Saptamana 2 urina pentru realizarea uroculturii, materii fecale pentru realizarea de coproculturi
2) Gastroenterite– materii fecale pentru
realizarea de coproculturi
– lichid de vărsătură– alimente
3/1/2018
18
Salmonella Examenul microscopic din produs patologic
- Nu oferă informaţii relevante
Salmonella Coprocultura
Izolarea- Medii de îmbogăţire:
- Mediul cu selenit acid de sodiu
- Medii selective şi de diferenţiere- Drigalski- Levin- Leifson- Istrate-Meitert- MacConkey
3/1/2018
19
Salmonella Caractere morfo-tinctoriale
Bacili Gram-negativiMobili (preparat nativ)
Salmonella Proprietăţi de cultură
Mediul DrigalskiColonii lactozo-negativeColonii S
3/1/2018
20
Salmonella Proprietati de cultura
Geloza HektoenH2S
Salmonella Teste biochimice
H2S
3/1/2018
21
Creste pe mediul Simmons, cu citrat
Salmonella Teste biochimice
Salmonella Proprietăţi antigenice
- Schema de identificare antigenică Kauffmann-White
Ag “O” – caracteristică de GRUP Ag “H” - caracteristică de TIP (variaţie de fază)Ag Vi <=> Ag K – de suprafaţă Serotip = enumerarea completă a Ag O, Vi şi H1,2
3/1/2018
22
Salmonella Reacţia Widal
- r. aglutinare în tuburi
- Febre tifo-paratifoide - Creşterea titrului de anticorpilor aglutinanţi
anti-O şi anti-H
Salmonella Antibiograma
• Cloramfenicol• Ampicilina• Cefalosporine• Trimethoprim-Sulfametoxazol• Chinolone• Aminoglicozide
3/1/2018
23
Salmonella
Profilaxie• Masuri de igiena personala si publica (! Purtatorii
sanatosi)• Vaccin antiSalmonella tiphy, dar ofera protectie
limitata in timp; doar pentru populatia la risc
Professional cook for affluent families –whenever she settled in, most of the family members developed typhoid fever within 2 weeks.
Twice forcibly isolated, died after a total of nearly three decades of isolation.
Thought to be responsible for 20-30 outbreaks of the ilness.
After the first quarantine, changes her name to Mary Brown and continues to work as a cook.
After death, autopsy reveales the presence of S. typhi in her gallbladder.
Mary Mallon (1869-1938)
3/1/2018
24
Enterobacterii oportuniste
Escherichia
Klebsiella – Enterobacter – Hafnia – Serratia
Proteus – Providencia – Morganella
Arizona – Edwarsiella – Citrobacter
Enterobacterii oportuniste
Escherichia coli
~ 80% flora normală a colonului
~ bacili Gram-negativi
~ lactozo-pozitivi
~ luciu metalic – mediul Levin
3/1/2018
25
Escherichia coli
Tipuri de îmbolnăviri:
• boli diareice – doar tulpinile enteropatogene
• infecţii urinare
• infecţii ale plăgilor
• sepsis
Escherichia coli
Tulpini care produc boli diareice:
~ ETEC (E.coli enterotoxigen)
~ EIEC (E.coli enteroinvaziv)
~ EPEC (E.coli enteropatogen)
~ EHEC (E.coli enterohemoragic)
~ VTEC (E.coli produce toxină Shiga-like) → O157:H7
3/1/2018
26
GENUL ESCHERICHIAE. coli
Frotiu colorat Gram din cultura pura
E. coli pe mediul ADCL (bacterie lactozo-pozitiva)
3/1/2018
27
E. coli
Mediul LevineMediul Drigalski
E. coli
Mediu cromogen
Colonii roz
3/1/2018
28
Escherichia coliIdentificare biochimică
IMViC• Testul indol• Testul roşu metil• Reacţia Voges-Proskauer• Testul citrat
OXIDATIE-FERMENTATIE
E. coli este un bacil lactozo-pozitiv si care degradeaza si fermentativ glucoza
Mediul TSI neinsamantat
3/1/2018
29
Teste biochimice rezultate din tipurile de fermentatie
• TESTUL ROSU-METIL
• TESTUL VOGES-PROSKAUER
TESTUL ROSU-METIL
• Scop: fermentarea substratului si scaderea pH-ului sub 5• Tehnica:
– tulpina bacteriana testata se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – Incubare 18h la 37 C. – Developare cu solutie rosu fenol
• Interpretare: – Test + culoare rosie (pH<5): E. coli– Test - culoare galbena (pH>5): Klebsiella
3/1/2018
30
TESTUL VOGES-PROSKAUER
• Scop: evidentierea fermentatiei acetoinice
• Tehnica: – tulpina bacteriana se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – incubare 18h la 37 C. – Se alcalinizeaza. – Developare cu alfanaftol.
• Interpretare:– test + inel rosu-violaceu la interfata de contact: Klebsiella– Test - : E.coli
TESTUL VOGES-PROSKAUER
3/1/2018
31
TESTUL INDOL
• Scop: evidentiaza prezenta triptofanazei• Tehnica:
– cultura bacteriana de 24h in apa peptonata – benzi indicatoare cu reactiv indol.
• Interpretare: – test + culoare rosu-violaceu (E.coli)
Grupul Klebsiella – Enterobacter – Hafnia –Serratia
Klebsiella pneumoniaeKlebsiella rhinoscleromatisEnterobacter cloacaeEnterobacter aerogenesHafnia alveiSerratia marcescens
3/1/2018
32
Grupul KEHSTipuri de îmbolnăviri:
~ Dobândite în spital~ Infecţii cu localizări <=> E.coli~ Cauze importante de bacteriemii~ Klebsiella pneumoniae – inf. pulmonară~ Majoritatea → tulpini cu rezistenţă mul plă la
antibiotice
Klebsiella pneumoniae
~ cantităţi moderate în intestinul omului /animalelor
~ infecţii respiratorii, urinare, otite~ bacili Gram-negativi~ capsulă polizaharidică ~ colonii mari mucoase , fenomen de
cameleonaj
3/1/2018
33
KlebsiellaKlebsiella
Frotiu coloratia tuş de China
3/1/2018
34
Klebsiella pneumoniae – colonii mucoase datorita capsulei
Klebsiella
Proprietati biochimice
3/1/2018
35
Proteus vulgaris, P.mirabilis
~ saprofiţi (materie organică în descompunere)~ flora intestinală normală~ infecţii urinare, alte tipuri de infecţii~ bacili Gram-negativi, mobili~ lactozo-negativi~ invadează suprafaţa mediilor gelozate
Genul Proteus
Proteus vulgaris
Flageli
3/1/2018
36
Genul Proteus – fenomenul de migrare
PRODUCEREA DE H2S
3/1/2018
37
TESTUL UREAZEI
• Scop : evidentierea ureazei, enzima ce scindeaza ureea cu formare de amoniac
• Substrat: mediu de cultura ce contine uree si indicator colorimetric (de Ph).
• Tehnica:– tulpina bacteriana testata se inoculeaza in mediu. – Se incubeaza 18h la 37 C.
• Interpretare:– test+viraj corespunzator al zonei bazice: Proteus
Proteus spp.
Ureaza +
H2S
3/1/2018
38
TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI
• Scop: evidentierea prezentei FAD• Substrat: agar inclinat ce contine fenil-alanina• Tehnica:
– tulpina bacteriana se insamanteaza pe panta agarului. – Developarea reactiei cu FeCl3
• Interpretare: test+ aparitia culorii verzi (Proteus)
Yersinia pestis
~ ciuma (pesta)
~ bacili Gram-negativ
~ capsulă proteică
Yersinia enterocolitica~ Sdr. Diareic febril
Yersiniapseudotuberculosis~ Inf. la păsări, rozătore, rar
om~ Lez. tipică: noduli
asemănători celor tbc în intestin, org. parenchimatoase
3/1/2018
39
Identificarea bacteriilor utilizand proprietatile lor biochimice
bioMérieux VITEK2
3/1/2018
40
MALDI-TOF(Matrix-assisted laser desorption/ionization - Time of Flight Mass Spectrometry)
Dupa identificarea bacililor Gram negativi se realizeaza testatrea sensibilitatii lor la antibiotice
Antibiograma – obligatorie • Beta-lactamine• Carbapenemi• Cefalosporine• Chinolone• Aminoglicozide • Polimixine (Colistin)• Trimetoprim-sulfametoxazol
3/1/2018
41
Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi
Pseudomonade
- bacili Gram negativi
- strict aerobe, metabolism oxidativ
- catalazo-pozitivi si oxidazo-pozitivi
Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi
Pseudomonade• specii fluorescente, care produc pigmenti
difuzibili fluorescenti: – Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)– Pseudomonas putida, – Pseudomonas fluorescens;
• specii non-fluorescente: – Pseudomonas alcaligenes, – Pseudomonas pseudoalcaligenes.
3/1/2018
42
Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)
• patogen nosocomial (10% din totalul infectiilor nosocomiale)
• Bacterie oportunistă• Habitat:
– sol, apă – Poate coloniza tubul digestiv şi pielea persoanelor
sănătoase
Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)
• ITU• infectii de tract respirator• infectii ale plagilor, suprainfectii ale arsurilor• bacteriemie, septicemie, infectii sistemice, mai ales
la pacientii imunocompromisi• otite externe la inotatori ;
• infectii oculare dupa interventii chirurgicale
3/1/2018
43
Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)
Proprietati microscopice:
• bacili Gram negativi
• mobili
Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)
Proprietati de cultura:
• pigment difuzibil fluorescent de mai multe tipuri:* piocianina, albastra, cu proprietati antibacteriene fata de alte specii bacteriene* pioverdina, galben-verde culoarea verde, stralucitoare* piorubina, rosie, ocazional*piomelanina, bruna, ocazional
• cultura degaja o aroma caracteristica, aromata, asemanatoare cu florile de tei, iasomie, mere verzi
• strict aeroba
3/1/2018
44
Pseudomonas spp.► Bacil Gram-negativ, mobil► Nefermentativ
► Se dezvoltă pe medii simple, geloză nutritivă → producere de pigment difuzibil
Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic)
Antibiograma – obligatorie • foarte rezistenta la antibiotice;• are rezistente naturale multiple, datorate structurii
peretelui celular.• Carbapenemi• Penemi • Unele Cefalosporine gen. III; gen. IV• Chinolone• Aminoglicozide • Polimixine (Colistin)• In caz de monoterapie dezvolta rapid rezistenta.
3/1/2018
45
Genul Vibrio
• bacterii Gram-negative
• foarte mobile (cil polar)
• formă de bastonaş încurbat
• facultativ anaerob
• majoritatea speciilor saprofite, unele produc îmbolnăviri
uşoare
3/1/2018
46
Specia tip: Vibrio cholerae
• două biotipuri holerigene: ► cholerae clasic► El Tor
• V. cholerae O139 "Bengal" (1992, Bangladesh → derivate din biotipul El Tor
• mai multe biotipuri neholerigene (sindroame diareice benigne)
Habitat: apa de mare, apa de suprafaţă
Contaminare:► apă, alimente
contaminate ► fecal-orală
Infecţie:Holera = infecţie acută,
intestinală
► diaree apoasa► deshidratare masivă► stare generală alterată► evoluţie severă
Genul Vibrio
3/1/2018
47
Structura antigenică
variaţia antigenică → rol în epidemiologia
holerei şi virulenţa vibrionilor holerici
• Ag H (flagelar) → specificitate largă
• Ag O (soma c) → strict specific
• Şase serogrupuri O1 → O6 • Vibrionii holerigeni = serogrup O1 conţin trei factori
antigenici: A, B, C
• ► 3 serotipuri: → Ogawa (AB)→ Inaba (AC)→ Hikojima (ABC)
• ► Fiecare serotip poata exprima fenotip „casic” sau El Tor
• ► V. cholerae O139 "Bengal" este singurul serotip non-O1
3/1/2018
48
3/1/2018
49
Recoltarea produselor patologice
► Materii fecale → mediu de transport Cary-Blair
► Lichid de vărsătură
►Apă potabilă, alimente
Izolare
► apă peptonată alcalină (mediu de îmbogăţire)
► mediu cu săruri biliare (BSA)
3/1/2018
50
a) Caractere morfo-tinctoriale:
bacili Gram-negativiîncurbaţi
Genul Vibrio
b) Caractere de cultură:► Mediul BSA: Colonii tip S, transparente
c) Caractere antigenice:► vibrionii holerigeni aglutinează cu ser
anti-O1► vibrionii neholerigeni nu aglutinează cu ser anti-O1 (neaglutinabili – NAG)
d) Caractere de patogenitate: testul ansei ligaturate
Genul Vibrio
3/1/2018
51
Tratament
• reechilibrare hidro-elecroliticăantibiotice: • Tetraciclina• Cloramfenicol• Sulfamide• Aminoglicozide• Chinolone
Genul Helicobacter
• bacili Gram negativi, incurbati pana la spiralati• mobili prin unul/mai multi flageli• microaerofili• speciile gastrice se caracterizeaza prin producerea de ureaza
in cantitati mari• Implicat in etiologia ulcerului gastric si duodenal, a diferitelor
tipuri de gastrite, a cancerului gastric
3/1/2018
52
Helicobacter pylori
Recoltarea produselor patologice: biopsie din mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.
• Important: cel putin o luna fara tratament inainte de recoltarea probei.
un fragment plasat direct in mediu cu uree si indicator de pH (rosu fenol)+ureaza preformata a HP =>virarea indicatorului de pH in galben;
examen histopatologic
3/1/2018
53
Helicobacter pylori
Recoltarea produselor patologice: biopsie din mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.
frotiu: bacili Gram negativi, incurbati; IF pentru diagnostic diferential cu Campylobacter
cultura: colonii mici, transparente, apar in 3-7 zile; permite testarea sensibilitatii la antibiotice.
Helicobacter pylori
Metode neinvazive:• testul respirator cu uree marcata :
– ingerare uree marcata cu C13 (neradioactiv) sau C14 (radioactiv) => intensa activitate a ureazei, daca exista HP in stomac => eliberare de CO2 marcat, absorbit in circulatia sanguina si eliminat prin respiratie => detectat si cuantificat in aerul expirat (spectroscopie de masa);
– dezavantaj: este foarte costisitor.
3/1/2018
54
Helicobacter pylori
Helicobacter pylori
• detectarea anticorpilor specifici, in special de tip IgG; • ELISA; • cost relativ scazut, • indicat preferential in studii epidemiologice.
3/1/2018
55
Helicobacter pylori
Indirect diagnosis: SerologicDetection of specific antibodiesELISA – Ig G anti HP
Helicobacter pylori
Determinarea antigenului din materiile fecale recoltate de la pacient – test imunocromatografic, rapid, 15-20 min.
3/1/2018
56
Helicobacter pylori - Tratament
• Combinatie intre un inhibitor de pompa de protoni (ex. Omeprazol, esoprazol… ) si 2 antibiotice pentru 10-14 zile
• Macrolide (Claritromicina), • Amoxicilina,• Metronidazol, • Chinolone.